文档介绍：血药浓度测定实验报告
氨茶碱的血药浓度测定实验报告
氨茶碱的血药浓度测定及药动学参数计算
一、【目的】掌握血清中氨茶碱血药浓度的紫外测定法,掌握血清中茶碱提取法,验证氨茶碱的动力学模型,掌握二房室动力学模型的参数计算方法。用有机溶剂将血清中的氨茶碱提出,用紫外测定法根据标准曲线测出氨茶碱浓度,用残差法运用计算机进行数据处理、曲线描绘及参数计算,从而验证氨茶碱动力学模型,使大家对药动学研究有一初步的了解。
二、【原理】氨茶碱为临床常用平喘药,由茶碱与乙二***缩合而成,在体液中可分离出茶碱。在酸性条件下,可用有机溶剂从血清中提出茶碱,并同时沉淀血清蛋白,再用碱液把茶碱从有机溶剂中提出(见图1)。测量λ274和λ298处的吸光度(A274为茶碱和本底,即溶剂、血清的吸光度,A298为本底的吸光度)。茶碱的吸收度为△A = A274 ?A298,使用UV1601双波长分光光度计测定(见图2)。
取血试管
酸性分离管
碱性分离管
NaOH
含茶碱的

图2
氨茶碱经静脉进入血液,随血液循环进行组织分布,达到平衡后转入消除相。时量曲线呈二房室动力学模型,公式为C = Ae-t +Be-t,曲线由分布相Ca = Ae-t和消除相Cb =Be-α
β
α
β
t
两部分组成,其对数表达式分别为log Ca = (-αlog e) t + log A 和log Cb = (-βlog e) t + log B(见图3),在对数坐标上由于分布相较早趋近于零,故可先在时量曲线终末段直线回归法求出消除相对数表达式log Cb = (-βlog e) t + log B,然后用差数法求出Ca = C - Cb,再次运用直线回归法求出分布相对数表达式log Ca = (-αlog e) t + log A,最终得到所有的参数A、α、B和β,从而得到时量曲线C = Ae-t +Be-t 。
α
β

三、器材:玻璃试管、离心管、注射器、吸管、离心机、微量进样器、UV1601双波长分光光度计。药品与试剂:氨茶碱标准液, N HCl, N NaOH,异丙醇:***仿抽提液(5:95)。动物:家兔,~3 kg。
四、【方法步骤】
1. 动物实验:给药、不同时段取血,测定一系列血药光密度(ΔAt)
取健康家兔一只,用二甲苯涂擦兔耳以扩张血管,静脉注射肝素750IU/kg抗凝,。经4min后一耳缘静脉注射氨茶碱(2分钟内注射完),另一耳缘静脉在不同时段取血,取血时间(x)如表2。2500转/分离心5分钟分离血清,各管均取血清0. 25 ml于试管中, ml、 ml,振摇混合,2500转/分离心10分钟,吸取***仿液(下层)2 ml置另一试管中, N NaOH溶液2ml,振摇混匀,2500转/分离心10分钟,吸取碱液(上层),以空白血为参比,测定一系列ΔAt,结果填入表2的第一和第二列。
操作流程如图4:

取试管5支,、40、60、80和100 ?l, N NaOH溶液使总容积为4 ml,、、、、 ?g/ml,测定各管△A,填入表1。
五、【数据处理】
(1) 利用Excel求药物光密度(Y)与浓度(X)之间的回归关系Y = A’+ B’X

标准管号
茶碱标准液(ml) NaOH 溶液
(ml)
茶碱浓度X(?g/ml) 光密度Y (△A)
回归方程
1
2
3
4
5
Y=-
Excel模板已经做好,仅需要在标准直线工作表中的第二列填入相应的△A值,Excel便自动绘出茶碱光密度——浓度回归直线(见图5),并标明其表达式Y = A’+ B’X,给出相应的统计参数截距A’=-、斜率B’=’=
。
图5
(2)计算不同时段血药浓度,求时量曲线C = Ae-t +Be-t及药动参数
α
β
不同时间点x (min)及其相应血药光密度(ΔAt)已经填入了表2的第一和第二列,在Excel模板“血药浓度计算”工作表中已预先拷入了表2,则相应