文档介绍：磷酸二酯酶4(ENPP4)ELISA试剂盒说明书
本试剂仅供研究使用  标本:体液
磷酸二酯酶4(ENPP4)ELISA试剂盒说明书试验原理:
BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。
磷酸二酯酶4(ENPP4)ELISA试剂盒说明书自备材料
。
:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
。
安全性
、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
、抽烟或使用化妆品。
。
磷酸二酯酶4(ENPP4)ELISA试剂盒说明书操作注意事项
,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
,密封保存,以免变质。
。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
、加液的量及顺序进行温育操作。
磷酸二酯酶4(ENPP4)ELISA试剂盒说明书样品收集、处理及保存方法
1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。
磷酸二酯酶4(ENPP4)ELISA试剂盒说明书操作步骤
,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
。
局限
6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。
磷酸二酯酶4(ENPP4)ELISA试剂盒说明书性能
1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。。
2. 特异性:不与其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
磷酸二酯酶4(ENPP4)ELISA试剂盒说明书结果判断与分析
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的BFGF标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的BFGF含量可根据其O