文档介绍：实验16 酶的特异性和影响酶反应速度的因素
一、目的
1、了解酶的特异性。
2、了解温度、pH值、激活剂和抑制剂等因素对酶反应速度的影响。
3、掌握检查酶的特异性,酶的激活剂和抑制剂影响酶反应速度的方法及原理。
4、学****测定酶最适pH值的方法。
二、原理
酶是生物体中具有催化功能的蛋白质,因此也叫生物催生剂。生物体内存在多种多样的酶,从而使生物体在温和的条件下能迅速完成复杂的生物化学反应。
酶具高度的特异性。所谓特异性是指一种酶能对一种化合物或一类化合物起催化作用,而不能对别的物质发生催化反应。
淀粉和蔗糖无还原性。唾液淀粉酶水解溶粉生成有还原性的麦芽糖,但不能催化蔗糖水解。蔗糖酶能催化蔗糖水解产生还原性的葡萄糖和果糖,但不能催化淀粉水解,用Benedict试剂检查糖的还原性。
温度和pH对酶的活性有显著的影响,使反应速度达最大反应值时的温度称为某种酶作用的最适温度。大多数动物酶的最适温度为37℃~40℃,植物酶的最适温度为50℃~60℃,能使酶表现其活性最高时的pH值称为该酶的最适pH值,不同酶的最适pH值不同。
酶的活性常受某些物质的影响,能使酶活性增加的物质称为酶的激活剂,能使酶的活性降低的物质称为酶的抑制剂。***离子为唾液淀粉酶的激活剂,铜离子为其抑制剂。
三、材料、试剂与器具
(一)材料
1、干酵母
2、黄豆粉
(二)试剂
1、2%蔗糖溶液:蔗糖是典型的非还原糖,若商品蔗糖中还原糖含量超过一定标准,则呈现还原性,这种蔗糖不能使用,所以实验必须进行检查,本实验用的蔗糖至少应是分析纯的试剂。
2、%***化钠的1%淀粉溶液(新配制)。
3、释释200倍的新鲜唾液(5滴唾液,加蒸馏水稀释至50毫升)。
4、蔗糖酶溶液:取干酵母100克,置于乳钵内,加适量的蒸馏水和少量石英砂,用力研磨提取1小时,再加蒸馏水使总体积约500毫升,过滤,将滤液保存于冰箱备用。
5、本尼迪克特试剂(Benedict):,冷却,稀释至150毫升,取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠(Na2CO3)100克,加水600毫升,加热使之溶解,冷后后稀释至850毫升。最后把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠一碳酸钠溶液中,摇匀,用细口瓶贮存,此试剂可以保存很久。
6、%淀粉溶液。
7、1%***化钠溶液。
8、1%硫酸铜溶液
9、1%的硫酸钠溶液
10、碘化钾—碘溶液(稀)。
11、%***%淀粉溶液。
12、1%尿素溶液
13、脲酶提取液:取黄豆粉6克,加30%乙醇250毫升,振荡10分钟,过滤,可保存1~2星期。
14、奈斯勒试剂:称取5克碘化钾,溶于5毫升蒸馏水中,加入饱和***化***溶液(***化***)并不断搅拌。直至产生的朱红沉淀不再溶解时,再加40毫升50%氢氧化钠溶液,稀释100毫升,混匀,静置过夜,倾出清液于棕色瓶中。
15、%***%淀粉溶液(新配制)
16、
17、
(三)器具
1、试管及试管架
2、移液管(1,2,5毫升)
3、冰浴
4、恒温水浴
5、白瓷板
6、秒表
四、操作步骤
(一)酶的特异性
1、淀粉酶的特异性实验
取试管6支,编号,按下表进行操作
管号