文档介绍：实验三、蛋白质的沉淀反应
1、实验目的
熟悉蛋白质的沉淀反应
进一步掌握蛋白质的性质
2、实验难点与重点

3、实验原理
蛋白质胶体溶液稳定的因素:水化膜、表面电荷
加入适当试剂使蛋白质分子处于等电点状态或失去水化层,或者与某些试剂结合成不解的盐后,蛋白质的胶体溶液就不稳定,并将产生沉淀。
改变蛋白质表面的水化层及电荷的主要途径有:
改变溶液的离子强度
改变溶液的pH
改变溶液的介电常数
改变溶液的温度
蛋白质沉淀可逆与不可逆的区别
能使蛋白质沉淀的试剂有:
高浓度中性盐
(NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl(中和蛋白质的电荷,可逆)
这种加入盐使蛋白质沉淀析出的现象称为盐析,用于蛋白质分离制备
有机溶剂
***、乙醇(破坏蛋白质水膜,用于在提取DNA等时去除蛋白质,冰浴条件沉淀蛋白质短时间内是可逆的,否则不可逆)
重金属盐
Hg2+、Ag+、Pb+ (与蛋白质中带负电荷时,形成不易溶解的盐,或改变蛋白质的空间结构)
生物碱试剂沉淀:三***乙酸,苦味酸,钨酸等(必须在溶液pH大于pI时,蛋白质带正电荷,可以与生物碱试剂结合)
加热变性沉淀:豆腐
等电点沉淀:Glu的生产
4、实验步骤
蛋白质溶液1ml
NaCl晶体少许,溶解,95%乙醇2ml
加入
混匀
观察沉淀产生
加水
沉淀是否溶解?
需要先加蛋白质溶液,再加饱和硫酸铵,否则清蛋白与球蛋白会同时析出
除去球蛋白
加多变成盐析,作用中和电荷,加速沉淀
蛋白质溶液5 ml
加入5 ml 饱和硫酸铵溶液
加入
微微摇动,静置数分钟
观察沉淀产生为球蛋白
过滤
滤液中加硫酸铵粉末
析出清蛋白,加水
沉淀是否溶解?
操作注意点:如加入硫酸铵粉沫过量,会有硫酸铵晶体出现,要与蛋白质沉淀区分开来。
蛋白质溶液2 ml