实验二总糖和还原糖的测定(DNS).doc

文档介绍：实验二总糖和还原糖的测定
──3,5-二硝基水杨酸比色法
 
一、目的要求:
 
掌握还原糖和总糖的测定原理,学****用比色法测定还原糖的方法。
 
二、实验原理:
 
在NaOH和丙三醇存在下,3,5-二硝基水杨酸(DNS)与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色,在540nm波长处有最大吸收,在一定的浓度范围内,还原糖的量与光吸收值呈线性关系,利用比色法可测定样品中的含糖量。
 
 
 
三、试剂和器材
 
1、试剂
3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂: DNS溶于200ml 2mol/L NaOH溶液中(不适宜用高温促溶),接着加入到酒石酸甲钠的热溶液中(192g就是酸甲钠溶于500ml水中),再加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠,摇匀溶解后,冷却定容至1000ml,暗处保存备用。
葡萄糖标准溶液:准确称取在105℃,加少量蒸馏水溶解后,以蒸馏水定容至1000ml。
6mol/L HCl:取250ml浓HCl(35%~38%)用蒸馏水稀释到500ml。
碘-碘化钾溶液:称取5g碘,10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH:称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
% 酚酞指示剂:。
1%淀粉

2、材料
淀粉。
 
3、器材
WFJ UV-2000型分光光度计,水浴锅,电炉,10ml比色管。
四、操作方法
 
1、葡萄糖标准曲线制作
取6支10ml比色管并编号,按下表顺序加入各种试剂。(表1)
试管号
0(空白)
1
2
3
4
5
葡萄糖标准液/ml






蒸馏水/ml






DNS试剂/ml






葡萄糖含量/mg






A540
混匀后置沸水浴上加热5min进行显色,取出后用流动水迅速冷却,,摇匀,在540nm波长下,用0号管调零,分别读取各管的吸光度值A540。以葡萄糖含量(mg)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。
  
2、淀粉水解及还原糖的提取
取1%淀粉25ml,放在100ml烧杯中,加入6mol/L HCl 10ml,然后加入蒸馏水15ml,混匀,于沸水浴中保温30min,取出1~2滴置于白瓷板上,加1滴I2-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全,则不呈现蓝色。水解毕,冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂,以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色,并定容到100ml,从中取10ml于100ml容量瓶中,定容至刻度,混匀,即为