文档介绍：综合实训大肠杆菌病的实验室诊断任务七细菌的菌种保存
主讲教师郭洪梅
实验目标
学会用液体石蜡覆盖保藏法保存菌种。
了解菌种的保存方法。
实验器材
恒温培养箱
大肠杆菌纯培养物
营养琼脂试管斜面
接种环
酒精灯
灭菌石蜡等
菌种保存方法
1、传代培养保藏法
有斜面培养、穿刺培养等,培养后于4~6℃冰箱内保存。
2、液体石蜡覆盖保藏法
是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。
3、载体保藏法
是将微生物吸附在适当的载体,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法
4、寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体等
5、冷冻保藏法
可分低温冰箱(-20~-30℃,-50~-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。
6、冻干法
先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。
液体石蜡覆盖保藏法
将液体石蜡分装于三角烧瓶内,塞上棉塞,并用牛皮纸包扎,121℃灭菌30分钟,然后放在40℃温箱内,使水汽蒸发掉,备用。
制备灭菌石蜡
1
菌种斜面培养
2
菌种覆盖石蜡
3
菌种保存方法
4
液体石蜡覆盖保藏法
内容
菌种斜面培养
2
菌种覆盖石蜡
3
菌种保存方法
4
制备灭菌石蜡
1
无菌操作打开平皿盖,接种环灼烧灭菌,冷却后挑取少许纯培养的菌落,将其立即伸入斜面培养基底部,由下而上在斜面上弯曲划线,然后管口和棉塞通过火焰灭菌后塞好,接种环灼烧灭菌后放回原处。
在斜面管口,写明菌种名,日期,置37℃温箱内,培养18~24h
液体石蜡覆盖保藏法
内容
菌种斜面培养
2
菌种覆盖石蜡
3
菌种保存方法
4
制备灭菌石蜡
1
用灭菌吸管吸取