文档介绍：复旦大学
硕士学位论文
α-硫辛酸抗氧化抗衰老作用和机制的研究
姓名:田芳
申请学位级别:硕士
专业:营养与食品卫生学
指导教师:仲伟鉴
20070521
复旦大学硕士学位论文略缩词
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作者签名:.必日期:丑盟
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复旦大学硕士学位论文中文摘要
中文摘要
?Lipoicacid,LA是三羧酸循环的重要辅基,它既是
能量代谢的关键因子,又是氧化还原反应的重要参与者,在抗氧化方面卓
具功效。活性氧自由基的氧化损伤是和衰老的自由基学说是自由基医学的
重要理论,目前国内有关LA对细胞活性氧自由基的实时影响,以及对实
验动物的抗氧化抗衰老作用鲜有报道。本课题通过一系列实验研究,从外
源性氧化剂诱导的细胞活性氧改变、DNA氧化损伤、氧化损伤后细胞的
修复和老年大鼠外周血细胞氧化应激几方面探讨LA的抗氧化、抗衰老作
用,以期为LA的应用提供剂量参考和体内外实验依据.
【方法l1LA对H202和Fe2+诱导的CHL细胞活性氧水平的保护作用:分
别以H202和Fe2+诱导细胞活性氧升高,,通过
流式细胞术研究LA对上述两种反应体系中活性氧的影响。
2LA对CHL细胞DNA氧化损伤的影响:H202诱导DNA氧化损伤用
单细胞凝胶电泳SCGE分析LA对DNA氧化损伤程度的影响。
3LA促进氧化损伤后CHL细胞的修复:四***噻唑蓝MTT比色法
测定各实验孔吸光度值OD值,探讨LA对细胞氧化损伤修复的影响。
4LA喂养的老年老大鼠外周血细胞氧化指标的改变:研究对象为18
月龄老年大鼠;用双氢罗丹明123DHRl23标记外周血细胞线粒体活性
氧,罗丹明123Rhl23指示线粒体膜电位,借助流式细胞仪评价LA对老
龄大鼠上述两项指标的影响.
I结果J1LA对H202和Fe2+诱导的CHL细胞活性氧水平的影响:①H202
引发胞质内活性氧水平骤升,荧光信号显著增强:LA能降低活性氧水平,
。②细胞活性氧水平随Fe2+;
并随刺激时问延长而增加;LA降低Fe2+诱导的活性氧升高,在观察时相
内,能持续抑制Fez+激发的活性氧。
2LA对CHL细胞DNA氧化损伤的保护作用:H202造成细胞DNA
断裂损伤,彗星率、尾部DNA百分含量TailDNA、尾长和Olive尾矩OTMl
:,表现出剂量.
反应关系。
3LA促进CHL细胞氧化损伤的修复:H202刺激后细胞正常形态改
复旦大学硕士学位论文中文摘要
变,死亡率升高; ,H202浓度越高细胞损
伤越严重。不同浓度LA修复培养后,细胞形态大部分恢复正常,OD值
随LA浓度增加而升高,,,
0D值有下降趋势。时间-效应研究发现,修复培养8,16,24h期问,LA
能持续发挥作用,.
4LA灌胃的老年大鼠外周血细胞氧化应激指标的改变:①老年大鼠外
周血细胞线粒体活性氧水平高于青年大鼠,线粒体膜电位低于青年对照
。②LA灌胃饲养一周后,实验组老年大鼠活性氧水平明显低于老
;线粒体膜电位升高,与老年对照组之间差异有统计意
。⑦停止灌胃3天,各实验组活性氧水平不同程度回升,低、
中剂量组回升幅度较大,高剂量组较小;线粒体膜电位变化不明显。④继
续用LA灌胃一周,活性氧水平下降;线粒体膜电位未见明显变化。
I结论l1H202和Fe2+均能诱导细胞活性氧增加:LA能降低此效应,在观
察时相内作用持久,具有剂量-反应关系,。
2LA剂量依赖性保护H202对DNA造成的损伤。
3LA促进H202损伤的CHL细胞的修复和增殖,
时修复能力最大.
4老年大鼠外周血细