文档介绍：第七章
酶免疫分析技术
目录
概述
1
酶联免疫吸附试验
2
酶联免疫吸附试验的应用和注意事项
3
其他酶标记免疫测定技术
4
返回总目录
酶免疫分析技术的分类
克隆酶供体免疫测定
酶免疫分析技术
酶免疫组织化学技术
酶免疫测定技术
均相酶免疫测定
非均相酶免疫测定
酶放大免疫测定技术
液相酶免疫测定
固相酶免疫测定
3
第一节概述
一、基本原理
酶免疫分析技术的原理是利用酶标记抗体(抗原)形成酶标抗体(抗原)结合物,此结合物既保留抗体(抗原)的免疫活性,又保留了酶对底物的催化活性。酶标抗体(抗原)与相应抗原(抗体)进行反应后,酶催化相应的底物显色,借助酶作用于底物的显色反应来判定结果。
二、酶和酶底物
标记酶的要求:
①活性高,纯度高
②作用专一性强
③性质稳定,易与抗原或抗体偶联
④测定方法简便易行、敏感、精确
⑤酶和底物对人体无害
⑥酶和底物价廉易得
(一)辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase ,HRP)
(主酶) 亚铁血红素(辅基)
主酶与酶活性无关辅基是酶的活性中心
:403nm(辅基)与275nm(主酶)OD值之比
,酶活性单位比RZ值更为重要
DH2十H2O2—D十2H20
HRP催化的反应式为:
DH2为供氢体****惯称为底物,H2O2为受氢体
HRP对受氢体的专一性很高,作用底物有多种。
邻苯二*** OPD
四***联苯*** TMB
5-氨基水杨酸5-ASA
2,2′-氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉磺酸-6)铵盐 ABTS
HRP常用底物
OPD反应后显橙黄色,加酸终止反应后呈棕黄色,测定波长492nm。不稳定,有致癌性。
TMB反应后显蓝色,加酸终止反应后变为黄色,测定波长450nm ,稳定,无致癌性,ELISA中应用最广泛的底物。
(二)碱性磷酸酶
(alkaline phosphatase,AP)
是一种磷酸酯水解酶,从大肠杆菌提取
AP的
底物
对-硝基苯磷酸酯( pNPP )
经AP作用后的产物为黄色对硝基酚,最大吸收峰波长为405 nm。