氡暴露对大鼠气管.doc

文档介绍：氡暴露对大鼠气管
在人类生活环境的天然本底辐射中,由于吸入氡及其子体所产生的辐射剂量约占54%,氡暴露导致的健康危害,已成为近年来的研究热点。大鼠气管-支气管上皮细胞是研究氡暴露生物效应的良好模型,但由于受到染毒装置等条件的限制,过去多进行体外研究。本实验利用多功能移动式氡室对大鼠动态吸入染毒,利用建立的动物模型,采用消化后刷洗法分离得到大鼠气管-支气管上皮细胞〔1〕,观察氡染毒后靶细胞体外发生转化的过程,探讨氡暴露对细胞的损伤效应。 1 材料与方法
11 实验动物处理实验用onth,)和对照组共4组,每组6只动物。染毒时间每天8h,每周6d,染毒期间动物自由活动饮食。
12 选择性培养基制备选择性F12培养基为Ham’s F12培养基,含有2%胎牛血清,5mg/L胰岛素,03μ mol/L氢化可的松。
13 气管-支气管上皮细胞的分离和培养实验组及对照组大鼠气管-支气管上皮细胞的分离和培养采用本实验室建立的消化后刷洗法,见文献〔1〕。
14 细胞集落形成率收集大鼠气管-支气管上皮细胞,制成细胞悬液,以1×105个/60mm培养皿接种于无血清完全F12培养基中37℃5%CO2培养箱中培养,7~8d后计数其形成的细胞集落数,并根据接种的细胞量计算细胞集落形成率(CFE)。一个细胞集落的标准是含有15个细胞以上的细胞团,CFE=细胞集落数/接种的细胞量×100%。
15 细胞存活率根据CFE得出的结果,计算出大鼠气管-支气管上皮细胞存活率。其计算公式为:细胞存活率=氡暴露组细胞集落形成率/对照组细胞集落形成率×100%。
16 转化细胞筛选上述细胞集落计数后,即转入选择性F12培养基对气管-支气管上皮细胞进行筛选。4d换液1次,选择性培养5周,计数转化细胞集落并统计转化率(TF),TF=转化细胞集落数/进入选择的细胞集落数×100%。
17 转化细胞系的建立大鼠气管-支气管上皮细胞经选择性培养5周后,根据Kitamural〔2〕报道的形态学标准,细胞小而密集的Ⅲ或Ⅳ型集落是具有转化趋向的集落,倒置显微镜下鉴定后,用消毒棉签除去其他的集落细胞,使每皿只含有一个转化集落,继续培养,对Ⅲ或Ⅳ型集落扩增,然后转移到培养瓶中,进行传代培养。
2 结果
21 氡染毒对大鼠气管-支气管上皮细胞转化的影响(表1) 随着氡暴露累积剂量的增加,大鼠气管-支气管上皮细胞的集落形成率相应下降(图1,r=-0
98,P<),而转化率则随之增加,呈一定的剂量-反应关系。当暴露量达到90时,无论集落形成率还是转化率,与对照组相比较,差异均有统计学意义,P<001。
表1 氡暴露对大鼠气管-支气管上皮细胞的转化(略)
注:与对照组比较,*P<001
图1 大鼠气管-支气管上皮细胞集落形成率和转化率与氡累积暴露量的关系(略)
2