文档介绍：肉苁蓉提取物对帕金森病细胞损伤模型的保护作
:王虎, 李文伟, 蔡定芳, 杨茹
【关键词】肉苁蓉; 1布谆4脖交策拎だ胱; 帕金森病; 生存率
帕金森病(Parkinson’s disease, PD)是中枢神经系统进行性变性疾病。一旦出现临床症状,其黑质纹状体系统多巴胺神经元已经减少了60%~80%。尽管神经科学家采取包括左旋多巴制剂在内的各种治疗方法,但目前所有的研究都提示无法阻止其进展。生长抑制和DNA损伤诱导基因153(groage瞚nduced gene 153, GADD153)是调控细胞凋亡的一种重要蛋白,在细胞内质网应激等应激状态下大量表达并转位于细胞核[1]。本研究观察了肉苁蓉提取物对1布谆4脖交策拎だ胱樱1瞞ethyl4瞤henylpyridinium ion, MPP )介导的SH睸Y5Y多巴胺能细胞系损伤的保护作用及对GADD153表达的影响,并探讨了其对帕金森病的神经保护作用。
1 材料与方法
材料肉苁蓉提取物,上海市东方科技公司产品,PBS稀释成10 mg/ml,22 μm滤膜过滤灭菌;MPP ,Sigma公司产品,无菌蒸馏水稀释成4 mol/L;胎牛血清、达尔伯克改良伊格尔培养基(o's modified eagle's medium, DMEM)、胰蛋白酶,均为Gibco公司产品;GADD153小鼠抗人单克隆抗体,Santa Cruz公司产品;小鼠抗人β瞐ctin单克隆抗体,Sigma公司产品;甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT),荷兰Duchefa公司产品;反转录试剂盒(reverse transcriptase瞤olymerase chain reaction, RT睵CR),MBI公司产品;SH睸Y5Y细胞,复旦大学神经生物学国家重点实验室黄芳老师惠赠。
实验方法
细胞培养及分组 SH睸Y5Y细胞每2~3 d用10% DMEM培养液换液1次。待细胞增长至80%融合时,%胰酶消化细胞,按1×105分瓶传代,置于5% CO2的细胞培养箱中。实验用细胞分为对照组、MPP 组和肉苁蓉提取物不同浓度组。用DMEM培养液将MPP 按1∶10梯度稀释成400 mmol/L,按1∶100体积比例加入96孔板或6孔板中,使MPP 、、1、2和4 mmol/L。肉苁蓉提取物用DMEM培养液按1∶10梯度稀释成1 mg/ml与10 μg/ml两个工作浓度。按1∶100加入96孔板或6孔板中,使终浓度分别为1、10和100 μg/ml。6孔板每孔总体积为2 ml,96孔板每孔总体积为200
μl。每项相同实验均重复3次。(作文网zmol/L的培养液,每浓度3复孔,置于5% CO2培养箱37 ℃孵育,分别于6、12、24和48 h时各孔加入MTT 20 μl,继续孵育4 h取出培养板。吸弃培养液,每孔加入二甲基亚砜(dimethyl sulphoxide, DMSO)150 μl充分震荡10 min,待蓝色颗粒完全溶解后用全自动酶标仪(Biorad产品)570 nm处测定吸光度值。
肉苁蓉提取物对MPP 介导的SH睸Y5Y细胞损伤的影响终浓度1 mmol/L MPP 与肉苁蓉