文档介绍：1. ,放入65℃水浴锅中预热
2. 在液氮预冷好的研钵中将样品磨细,磨样时加入适量的PVP,分装于预热好的离心管中,每管大概4-5药匙,涡旋仪上涡旋混匀。然后将离心管放入65℃水浴锅中加热,期间不时上线颠倒混匀。加热20-30min。
3. 在加热好的混合物中加入25:24:1(酸性饱和酚:氯仿:异戊醇),直至将离心管加满,大概在2ml左右。混合均匀后12000转10min,常温离心。
4. 将离心后的上清液转入新的5ml离心管中,大概有3ml左右,然后再加入3ml的24;1
(氯仿:异戊醇),上下颠倒混匀后12000转10min,常温离心。
5. 重复第4步一次。
6. ,每管1ml,。此时能看到一些白色的沉淀。上下颠倒混匀后放入-70℃冰箱中冷冻过夜。
7. 第二天将冷冻过夜的离心管在4℃条件下12000转10min,离心完成后将液体倒掉,再加入65℃,:24:1,颠倒混匀后12000转10min,常温离心。
8. 将离心后的上清液转移至新的离心管中,再加入等体积的24:1。混匀后12000转10min,常温离心。
9. 重复第8步一次。
10. ,,然后加入1ml的无水乙醇,混匀后放入-20℃冰箱中冷冻2h。
11. 冷冻完成后-4℃12000转10min离心收集沉淀。
12. 收集到的沉淀中加入DEPC水处理的75%。将沉淀弹起,洗涤沉淀中的阳离子。
13. 12000转10min常温离心后,将液体倒掉,。
14. 12000转10min常温离心后,将液体倒掉,通风条件下晾干管中液体,再依据沉淀的量加入DEPC水将沉淀溶解。
15. 在溶解好沉淀的溶液里加入1ml的Trizol试剂,。混匀后12000转10min常温离心。
16. 转移上清液于另一离心管中,加入2倍体积的无水乙醇。混匀后放入-70℃冰箱中冷冻1h。
17. 冷冻完成后4℃12000转10min离心收集沉淀。
18. 收集到的沉淀中加入DEPC水处理的75%。将沉淀弹起,洗涤沉淀中的阳离子。12000转10min4℃离心,倒去上清液。重复一次。
,通风条件下晾干管中液体,加入30μl DEPC水将沉淀溶解。
20. 吸取2μlRNA提取液,加入8μlDEPC水,混匀后,2μl用于检测浓度,8μl用于电泳检测。
21. 检测结果如下
B1
B2
3000bp
1000bp
500bp
图1;其中M为DNAruler两条亮带分别