文档介绍：实验二微生物的大小测定与显微计数
一、实验目的
学****并掌握用测微尺测定微生物细胞大小的方法。
了解血细胞计数板的构造及计数原理。
掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
二实验原理
酵母菌大小测定
在显微镜下,测微尺可完成对微生物大小的测定。测微尺包括目镜测微尺和镜台测微尺。目镜测微尺是一块放入目镜中的圆形玻片,在玻片中央把10mm的长度刻成100等分,用于测量经显微镜放大后的细胞图像。测量前,需先用镜台测微尺校正。镜台测微尺是专门用来校正目镜测微尺的。
微生物数量的测定
图一血细胞计数板构造
血细胞计数板(图一)是一块特制的载玻片,薄片上有4条槽构成3个平台,中间较宽的平台又被一短槽隔成两半,每一边平台各刻有一个方格网,每个方格网共分为9个大方格,中间的大方格即为计数室。
图二血细胞计数室构造(16×25)
计数室(图二)的刻度有两种:一种大方格分为16个中方格,每个中方格分成25个小方格;一种大方格分成25个中方格,中方格分成16个小方格。每个大方格都是400个小方格,边长为1mm,面积1mm2,盖上盖玻片后,,。
三实验仪器、材料和用具
实验用具:载玻片、盖片、200µ l移液器及tip、擦镜纸、装有蒸馏水的洗瓶。
实验仪器:普通生物显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球计数板、手动计数器;
菌种:酿酒酵母(200rpm,28℃,24h,稀释20倍)
四实验步骤
酵母菌大小测定
(1) 目镜测微尺的校正
在100倍镜下,使目镜测微尺的目镜和镜台测微尺某一个区域内两线完全重合。计数两重合刻度之间目镜测微尺和镜台测微尺的格数(格数必须是整数)。
(2) 细胞大小的测定
将稀释40倍的少量的酵母培养液涂在载玻片上,用盖玻片推开,放在载物台上。
用100倍镜观察,用目镜测微尺来测量酵母菌菌体的长、宽各占几格。测定20个菌体,统计计算。
(3)测定完毕后,将目镜测微尺和物镜测微尺擦拭干净包好归还。
微生物数量的测定
菌液准备:将啤酒酵母在28℃,100r/min培养8h。40倍稀释(由助教完成)。
镜检计数室:加样前,对计数板的计数室镜检,若有污物需要清洗,干燥后使用。
加样品:将血细胞计数器中间平台盖上盖玻片,用无菌水吸管将摇匀的啤酒酵母菌悬液由盖玻片的边缘滴一小滴,让菌液靠毛细渗透作用自动进入到计数室。
显微镜计数:加样后将血细胞计数板置于显微镜的载物台上,静置1min后,用4倍镜找到计数室,再换10倍镜进行计数。对两个计数室各计数一次。
酵母菌计数完毕后,马上将其用洗瓶冲洗,自然晾干,或者用擦镜纸轻轻擦干。
重新加样:按照前面的步骤再计数5次。利用公式计算出血细胞的数量。
五、实验结果
1. 酵母菌大小测定
已知镜台测微尺每格10μm,所以根据下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的实际长度:
物镜倍数(目镜10×)
目镜测微尺格数(小格)
镜台测微尺格数(小格)
目镜测微尺每格长度(μm)
100×
111
11
表一目镜测微尺标定结果.
菌号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
目镜测微尺格数(长轴)
6