文档介绍：旦欠攀。硕士学位论文指导教师:叁￡:垄—樗旦院系专业姓名上海医学院法医学刘洪国完成日期:学校代码学号
中文摘要目的研究兔阴茎海绵体平滑肌细胞的体外培养方法,兰尼碱受体在细胞中的表达情况及在胞内盷。浓度调节中的作用。方法取雄性性成熟新西兰兔,取出阴茎海绵体,用组织块法进行细胞培养,差速贴壁法细胞纯化,利用倒置显微镜观察、免疫荧光染色法鉴定细胞纯度;取阅贑赴通过查出序列,针对植煌切偷姆峭床糠用软件设计砸铮阅孀B糚方法分别检测盅切蚼谋泶铮撼上裣低撤治鼋峁蝗∩ね⒌腃细胞,分为两组,ü馊旧ǎ珹组:疞去甲肾上腺素激发,椋疞普鲁卡因疞激发,以激光扫描共聚焦显微镜观察胞内。浓度变化。结果培养开始有细胞从组织块长出,—蟪ぢ康祝实湫偷摹胺逡还取毕窒螅怪孟晕⒕倒鄄欤嘌细胞呈现典型的梭形,免疫荧光染色可见细胞内染为绿色的肌丝,证实培养的细胞为细胞,经差速贴壁法纯化后,细胞纯度接近ァ>璕甈检测,只表达醇鸕溆嘌切偷谋泶铮还簿劢瓜晕⒕迪录赴内绿色荧光着色,胞核不着色,榧尤隢し⒑螅赱Eǘ妊杆偕撸持续一段时间后下降,升高均值为.±ァTは扔闷章晨ㄒ虼淼南赴加激发后,。浓度上升的幅度及持续时间均减少,升高均值为.±ィ阶槎员扔忻飨圆钜臁=崧跜橹榉ㄅ嘌按炕螅梢源到很高的纯度,能为其他实验提供纯的细胞材料;细胞表达亚型;斡隒赴腫5鹘冢淙豢赡懿皇侵饕W饔茫崾疚们多角度地开展研究可以更全面地掌握阴茎勃起及的本质。关键词:细胞培养兰尼碱受体游离钙阴茎海绵体中图分类号:●
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引言但没有足够的硬度或持续足够的时间以完成性交活动。目前为止,公认的美国”及中国首次全国性调查均显示,已经成为男性的常见病。它的病因、病理生理、发病机理等非常复杂,目憾运恼锒霞爸瘟莆茨艿玫酵耆ń饩觯虼艘最近二、三十年,是分子生物学技术飞速发展的时代。世纪年代,一氧化氮在阴茎勃起中的主导作用被发现,这被认为是研究的一个革命性进展“谡飧龇⑾值幕∩希朔缑胰虻腅瘟埔┪镂鞯啬欠故土嘶⊙芯慷匀鲜都膊〉墓丶饔谩虽然作为一门新兴学科,男科学起步较晚,但大量分子生物学的技术已经渗透到男科学的基础研究工作中。目前国内、外对基础研究较多的是信号通路、离子通道、细胞间通讯、基因治疗等。对信号通路的研究主要集中在相关信号通路,对钙信号通路的研究相对较少。阴茎勃起与疲软受很多因素的影响,钙信号通路是一个包括钙信号产生、终止、分布、上游调控因子、下游结合蛋白等在内的一个庞大、复杂的系统。钙信号通路启动的先决条件是胞内盷。浓度的变化惺被岽嬖诟泼舳确⑸浠赱ǘ缺浠丛从兰尼碱受体网谥释上,在激动剂的作用下,能打开通道,释放胞内钙库中的”,升高胞浆内,的浓度,从而对钙信号通路产生影响。现有的研究显示,在多个部位如心、肺、脑等均有表达并对胞内矿牡鹘谄鸬街匾W饔谩阴茎海绵体平滑肌,赴〗是否存在,并参与调节,浓度,尚未见文献报导。本课题利用分子生物学的技术方法,进行了细胞培养的研究,探讨了如何获得纯化的钙信号通路的关系打下一个良好的基础,从而希望推动对男子性功能及的基阴茎勃起障碍珽是指阴茎不能勃起,或虽能勃起鞑榻峁砻鳌:~岁男性患病率为%。以后的研究影响了法医学中对的准确鉴定。但钙信号通路是最终的共同通路。两个途径,一是胞内外的交换,二是胞内钙库与胞浆的交换。”主要是通过钙通道“、钙泵。’”敖换黄鳌等完成交换。琑是钙通道的一种,它存在于肌浆细胞:利用—椒ǘ詒贑赴惴裼斜泶铮氨泶锖沃盅切徒了探讨;利用激光扫描共聚焦显微镜对细胞胞浆内。浓度的检测进行了研究,探讨了在其中的作用。本课题旨在为今后研究细胞与础研究工作。■●
研究一兔阴茎海绵体平滑肌细胞培养牧嫌敕椒细胞是阴茎海绵体的主要功能成分,各种因子调控的最终作用点就落在细胞上。当性刺激时,副交感神经、非肾上腺素非胆碱能神经末稍和血管内皮细胞,在一氧化氮合成酶淖饔孟率头乓谎趸钪战档胞浆内,浓度,使松弛,阴茎海绵窦充血,引发阴茎勃起。利用培养的细胞进行阴茎勃起及的研究有助于深入揭示阴茎勃起及的分子机制。自上世纪年代成功培养细胞以来,许多研究都转入围绕细胞培养来进行。我们在自己的实验室成功地建立了细胞的培养、纯化体系。性成熟新西兰兔,雄性,月龄,┐笱笛槎镏行胎牛血清贾菟募厩喙谷氨酰胺冢虾0咸厣镉邢薰痉肿羟乙基呱嗪乙硫磺酸,小鼠抗兔タ寺】固公司马抗小鼠标记二抗材料提供。主要试剂芤自制’自制培养基公司胰蛋白酶公司公司青霉素钾1敝埔┕硫酸链霉素1敝埔┕丙酮┘呕约凉主要仪器抽滤器一次性针头滤器公司窍赴嘌德国超净台罩莩で啪换璞赋倒置显微镜厍旃庋б瞧鞒垂●■
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