文档介绍：解读《全国艾滋病检测技术规范(2009年修订版)》
齐齐哈尔市疾病预防控制中心
样品的采集
根据检测项目的具体要求,确定采集样品的种类、处理、保存及运输的时限和方法,按照临床采血技术规范的要求操作,遵守生物安全要求。
用一次性注射器(或真空采血管)抽取一定量静脉血,室温下自然放置1-2h待血液凝固,血块收缩后经3000r/min离心15min,吸出血清备用。
抗凝血的采集
用加有抗凝剂的真空采血管(或一次性注射器抽取静脉血,转移至加有抗凝剂的试管),反复轻摇,分离血浆和血细胞备用。
应根据实验要求选用适当的抗凝剂,如CD4+/ CD8+T淋巴细胞测定可选用K3EDTA或肝素或枸櫞酸钠;HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用K3EDTA或枸櫞酸钠。
用于核酸定性检测时,采集的抗凝全血应在4~8h内分离PBMC和血浆,否则应在24~48h内分离血浆和血细胞。
样品保存
用于抗体检测的血清或血浆样品,应存放于-20℃以下,短期(1周)内进行检测的样品可存放于2-8℃。
用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20℃以下,进行病毒RNA检测的样品如需保存3个月以上应置于-80℃。
用于CD4+/ CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保存,样品采集时间超过48h则不可检测。
艾滋病检测筛查实验室检测的筛查阳性样品应及时送确证实验室,筛查阴性样品可根据具体需要决定保存时间,建议至少保存1~2个月。特殊用途或专项项目的样品根据具体要求确定保存时间。
艾滋病检测确证实验室收到的筛查阳性样品,无论确证结果任何,均应将剩余的样品保存至少10年,特殊用途或专项项目的样品根据具体要求确定保存时间。
HIV抗体检测
目的: 监测、诊断、及血液筛查的HIV抗体检测
要点: 筛查试验阳性不能出阳性报告;
严格遵守实验室标准操作程序;
严格按照试剂盒说明书操作;
注意防止样品间交叉污染。
HIV抗体筛查试验的方法
ELISA
快速检测(RT):明胶颗粒凝集试验(PA);
斑点EIA或斑点ELISA(dot-EIA);
斑点免疫胶体金(胶体硒)快速试验;
艾滋病唾液检测卡;其他。
确证实验检测的流程
方法:免疫印迹试验(WB)条带免疫试验,放射免疫沉淀试验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA)等。
试剂选择:使用HIV-1/2混合型试剂进行检测。
结果:阴性反应,报告HIV抗体阴性(—)
阳性反应,报告HIV—1抗体阳性(+)
不是阴性反应,又不满足阳性判断标准,报告HIV抗体不确定(±)
结合流行病学资料,可以在4周后随访检测,如带型没有进展或呈阴性反应,则报告阴性;如随访期间出现阳性反应,则报告阳性;如随访期间带型有进展,但不满足阳性标准,应继续随访到8周。如带型没有进展或称阴性反应则报告阴性;满足HIV抗体阳性诊断标准则报告阳性,不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。
检测信息的上报
各级艾滋病检测实验室所在结构每月应填写《HIV抗体检测数及阳性人数统计报表》并于每月10日前完成网络直报。未开展网络直报的单位,由县级疾病预防控制结构收集信息后统一上报。
质量控制
质量控制具体内容:指将质控品和检测标本一起实验操作,从质控值了解分析实验过程的质量情况。为了便于观测和概括,又使用了一些统计学方法进行归纳和分析。
质量控制贯穿实验的整个过程
实验前的准备
实验中的操作
实验后数据的整理