文档介绍：蛋白质分子量测定
蛋白质性质鉴定

蛋白质分析鉴定是蛋白质研究中的一个最基本技术,是确定蛋白质产品的是与非的问题,尤其是在研究新的蛋白质组分时显得更重要。研究一个新的蛋白质首先要从它的基本性质作为突破口,然后根据它的基本性质进行分离纯化,最终用纯品对其进行分析鉴定。如果对蛋白质的基本性质尚未搞清楚,工作起来将会困难重重。因此,蛋白质研究技术主要是对蛋白质的基本性质的进行分析鉴定。
蛋白质鉴定的主要参数
蛋白质分子是非常复杂的生物大分子,、最常用的参数,归纳起来主要有以下几种。
(1)蛋白质的质量鉴定(分子量)
(2)蛋白质带电性鉴定(等电点)
(3)蛋白质结构鉴定(一、二级结构、晶体、肽谱、NC-末端)
(4)蛋白质生物学功能鉴定(生物活性、比活、酶促动力学)
(5)免疫学鉴定(抗原-抗体反应、酶联免疫反应)
意义
确定分子大小
从氨基酸组成分析的结果求得准确的氨基酸组成
验证已测定的一级结构是否正确
常用测定分子量的方法
SDS-PAGE
凝胶过滤层析
质谱
核磁共振
一、SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子量
【基本原理】聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率,用它分离、检测蛋白质混合样品,主要是根据各蛋白质各组分的电泳迁移率的不同。这种迁移率的不同,就蛋白质分子本身而言,主要与其所带净电荷以及分子量和形状有关。
当电泳体系中含有一定浓度的十二烷基硫酸钠(SDS)时,则得电泳迁移率的大小只取决于蛋白质的分子量,从而可推测蛋白质的分子量。
SDS的作用原理 SDS是一种阴离子去污剂,能够与蛋白质结合,破坏蛋白质分子之间以及与其它物质分子之间的非共价键,使蛋白质变性而改变原有的空间构象。
蛋白质分子一经结合了一定量的SDS阴离子,所带负电荷的量远远超过了它原有电荷量,从而消除了不同种类蛋白质间电荷的差异。并且由于分子量越大的蛋白质结合的SDS越多,所带负电荷也越多,这就使各蛋白质-SDS复合物的电荷密度趋于一致。