文档介绍：兰州理工大学
硕士学位论文
人胰岛素原基因的设计克隆及在大肠杆菌中的表达
姓名:周贤婧
申请学位级别:硕士
专业:微生物与生化药学
指导教师:马建忠
20100430
摘要目前世界上近两亿名患者用胰岛索进行治疗⒄怪型技一颊叩氖炕乖谥鸾ピ加瘟粕系慕绞固悄虿』颊呤倜映ぁR鹊核匾话阕愦又怼⑴R冉硖崛⒂捎谄分子结构与人胰岛素存在差异,而诙锬谠嘀幸鹊鞍酌副冉匣钤荆链艘鹊核卦谔取时很容易被蛋白酶降解而失活,得率不商。随着糖尿病的发病率的升商,胰岛素制剂的需用量将相应增加,可能会引起供应的严重不足,这种情况促使人们产生了小以动物胰腺为原料,尽叮能开发人胰岛素制剂的要求。基藎工程合成人胰岛素则成为当今世界医药生产的首选。本实验日的设计并分子克隆适宜于大肠杆菌表达系统的人胰岛素原基因。以美闻家基冈库⒉嫉娜艘鹊核髟陌被嵝蛄形D0澹慰即蟪Ω司泶锵低车密码子偏好性以及所刖表达载体的特点,设汁人胰岛素原基冈为龉押塑酸片段,为使表达纯化方便插入癇两个酶切位点,利植絇步骤及匝叠延伸狿际酰逋庋由旎竦猛暾娜艘鹊核卦。,提取质粒鉴定并测序。测序止确的人胰岛素原懿迦隕高效表达载体一中进行了融合表达。实验结果如下:褂眉镜由霵技术,结合片段处理,体外延伸获得完整的具有大肠杆菌偏好的人胰岛素原皋髄链一右籄链烈蚱瓮ü承阅┒丝寺〗载体骸V柿4鸲ú庑蚪峁齆员龋階牡肮鉲质序列的丰贫任%.╬表达体系,通过诱导,表达融合蛋白。蛋电泳结果显示:含有空载体的大肠杆菌蚩侨τ蠫蚩白的表达,向含有Ц的融合蛋白在蛋分子量处有特异的蛋琁质条带。、培育温度。保凶;子的细胞表达量最高。结论:在酆厦秆由旆从η耙訩未恚商岣呓隙谈哺悄┒嘶较低专一性末端正确延伸的成功率。利用与片段预处娜结合的Αǎ隆巴暾木哂写蟪Ω司ê玫娜艘鹊核卦騂⒔⒃吮泶锾逑担晒υ谌肠杆菌中表达含人胰岛素原基【人娜诤向堪住っ鞯鞍妆泶锍晒Γ2罚!2窖究人胰岛素原蛋白的生物学功能奠定了荩础。我’ü治鋈诤系鞍子盏急泶锏氖毕啵优化了诱导表达条件,使融合蛋白的表达水平得剑提高。关键词:人胰岛素原;套叠夯蚩寺。淮蟪Ω司换虮泶人胰岛索啄荩冈的设汁兜降技人肠柯油巾的的太达
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英文缩写词表简写符号英文全称一囊庖氨苄青霉素乙酰丁香酮碱基对羧苄青霉素脱氧核糖核苷三磷酸溴化乙锭乙二铵四乙酸光密度聚合酶链式反麻利福、
别磴铄讹作者签名:/司,厌编闰贤碲日期:凵驴笕兰州理工大学学位论文原创性声明和使用授权说明日期:列口年铲月弓口日期:州口年乒月弓学位论文版权使用授权书原创性声明本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果作者签名:本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权兰州理工大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。由本人承担。
餓,即第绪论西云量三絡海蝗胰岛素的发展回顾与展望胰岛素足机体内唯一降低血糖的激素,也足唯一同时促进糖原、脂肪、蛋质合成的激素。不同种族动物恕⑴!⒀颉⒅淼的胰岛索功能大体相同,成分稍有差异。图为人胰岛素化学结构胰岛素由两个肽链组成。人胰岛素从衛个氨皋酸,,搅戳悠鹄础4送釧链階室泊嬖凇龆蚣胰岛素是胰岛细胞分泌的蛋白质激素。由于胰岛散布在胰脏外分泌腺的汪洋大海中,因此胰岛素在提取时很容易被蛋白酶降解而失活辏牢诺牟±硌Ъ襇在做胰导管结石病人的尸体解剖时发现胰脏的外分泌细胞已经坏死,但是大部分胰岛细胞仍然存活。他的观察发表在同年月的“加拿大的外科医生吹秸馄N恼乱院蠖偈笔艿搅似舴ⅲ舜右仍提取胰岛素的新设想,那就是将动物的胰导管结扎使分泌胰酶的外分泌腺坏死后冉提取胰岛素。年退闹郑嗦锥啻笱б窖г旱难鶦在多伦多大学生理系教授的实验室中丌始用狗进行试验。经过一个夏季的努力,他们终海功地从狗的萎缩胰脏中得到了有活性的提取液,然后给一条切除胰脏的狗汴射胰岛素,另一条切除胰脏