文档介绍：实验五、细菌的芽孢染色法
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一、实验的目的要求
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学****并掌握芽孢染色法
初步了解芽孢杆菌的形态特征
二、实验原理
芽孢又称内生孢子,能否形成芽孢及芽孢的形状、芽孢在孢囊的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。
芽孢壁厚,透性低,不易着色,一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色(芽孢呈无色透明状),而一旦染上色后又难以脱色。
芽孢染色法根据芽孢特点设计,除了用着色力强的染料外,还需要加热,以促进芽孢着色。当染芽孢时,菌体也会着色,然后水洗,芽孢染上的颜色难以渗出,而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染,使菌体和芽孢呈现出不同的颜色,因而能更明显地衬托出芽孢,便于观察。
细菌芽孢的基本构造
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孢外壁
芽孢衣
皮层
芽孢壁
芽孢质膜
芽孢质
芽孢核区
芽孢具有多层厚而致密的胞膜,由内向外依次为核心、内膜、芽孢壁、皮质、外膜、芽孢壳和芽孢外衣.
细菌芽孢的基本特性
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形成芽孢需要一定的外界条件,这些条件因菌种而异。炭疽芽孢杆菌在有氧(O2)条件下才能形成芽孢,而破伤风芽孢杆菌则在无氧条件下形成芽孢。通常细菌在营养不足时形成芽孢,但苏云金芽孢杆菌是例外。
细菌芽孢的基本特性
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芽孢对恶劣环境条件有很强的抵抗能力,尤其耐高温。有的芽孢可耐100℃沸水煮沸数小时。在一定条件下,芽孢保持活力数年至数十年之久。高温灭菌的判断标准就是细菌的芽孢是否被杀灭。
细菌芽孢的基本特性
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芽孢在适宜条件下,营养物如葡萄糖、乳酸和水分,会发芽形成菌体,但细菌的数量并未增加,所以芽孢不是一种繁殖方式。
芽孢抵抗力强的原因
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,蛋白质受热后不易变性;
,理化因素不易透入;
(DPA),DPA与钙结合生成的钙盐能提高芽孢中各种酶的热稳定性。
三、实验器材
:枯草芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌。
: 5%孔雀绿水溶液、%番红水溶液
、材料:二甲苯、香柏油、蒸馏水、95%乙醇、显微镜、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸。
四、实验方法(Schaeffer-Fulton氏染色法)
:常规方法涂片、干燥、固定。
:(1) 涂片上滴加3-5滴5%孔雀绿水溶液。
(2)用试管夹夹住载玻片一端,微火加热,自载玻片上出现蒸汽时,计时5min。加热过程中切勿使染料蒸干,及时补加染液。待玻片冷却后,用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。
(3)%碱性番红复染2min,水洗。
(4) 制片干燥后油镜观察。芽孢呈绿色,菌体红色