文档介绍：DMEM o’s modified Eagle’s medium 高糖液体培养基 DNMT1 DNA methyltransferase 1 DNA ***转移酶 1 DAPI 4',6-Diamidino-2-phenylindole 4',6 -二脒-2 -苯基吲哚 ECM extracellular matrix 细胞外基质
EDTA ethylene etra acetic acid 乙二***四乙酸
ERK extracellular signal-regulated kinase 胞外信号调节激酶
FBS fetal bovine serum 胎牛血清
HF Hepatic fibrosis 肝纤维化
HSC hepatic stellate cell 肝星状细胞
IP intraperitoneally 腹腔注射
MSP-PCR Methylation-Specific PCR ***化特异性 PCR min minute 分钟
mRNA messenger ribnucleic acid 信使核糖核酸
PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PMSF Phenylmethanesulfonyl fluoride 苯***磺酰*** PI3K phosphatidylinositol 3-kinase 磷脂酰肌醇 3 激酶
人第 10 号染色体缺失的
PTEN
Phosphatase and tension homolog
deleted on chromosome 10
磷酸酶及张力蛋白同源的基因
SDS sodium dobecyl sulphate 十二烷基硫酸钠
siRNA Small interfering RNA 小干扰 RNA
sec second 秒
SDS-PAGE
Sodium dodecyl sulfate polyacry- lamide gel electropheresis
十二烷基硫酸钠聚丙烯酰***凝胶电泳基质金属蛋白酶组织抑
TIMP tissue inhibitor of metalloproteinase
制因子
TNF-α tumor necrosis factor-alpha 肿瘤坏死因子-α
TEMED N’N’N’N-Tetramethylethylenediamine 四***乙二***
5-azadC 5-aza-2'-deoxycytidine 5-氮杂胞苷
DNA ***化在大鼠肝纤维化中的作用及其分子作用机制研究
研究生 卞尔保
导 师 李俊教授
(安徽医科大学药学院,合肥,230032)
中文摘要肝纤维化是慢性肝脏疾病发生发展过程中的共有病理反应,活化的肝星状细
胞分泌 ECM 增多是其发病的主要特征,因此肝星状细胞(HSC)活化被认为是肝
纤维化发生的关键环节,抑制 HSC 活化是抗肝纤维化治疗关键步骤。研究发现
DNA ***化在 HSC 活化过程中具有重要作用。为了进一步探讨 DNA ***化在肝纤维化中的作用机制,通过在体与离体两个方面观察 DNA ***化相关蛋白在肝组织与细胞中的变化,及其对 HSC 活化的影响,并探讨其部分作用机制。研究内容主要包括以下四个部分:
1. PTEN l4 诱导的大鼠肝组织中的表达及***化的状态
CCl4 皮下注射建立大鼠肝纤维化模型,正常组 10 只、模型组 20 只。自处理
之日开始,模型组大鼠皮下注射 50% CCl4 植物油溶液(1ml/kg)每周 2 次,共 12 周;
正常组给予同样剂量花生油皮下注射,在 12 周末,取肝组织进行病理组织学和 Masson 胶原染色检测,并检测 PTEN、α-SMA 在大鼠肝组织中的表达变化。实验结果表明,在肝纤维化形成过程中 PTEN 表达降低。利用***化特异性 PCR
(MSP-PCR)检测 PTEN ***化的状态,l4 诱导的大鼠肝组织中 PTEN
发生了高***化。
2. DNA ***化抑制剂使 PTEN 发生去***化及恢复了 PTEN 的表达,从而抑制 HSC
的活化
以大鼠肝星状细胞株 HSC-T6 为研究对象,利用 TGF-b1 5ng/ml 刺激 30m 后, 加入不同浓度的 5-AzadC 温育 48h,RT-PCR 方法检测 PTEN,α-SMA,Collagen I 的 mRNA 表达变化;免疫印迹观察 PTEN,α-SMA 蛋白的表达。利用***化特异性 PCR(MSP-PCR)检测 PTEN ***化的状态。实验结果表明,在体外 TGF-b1 诱导 HSC-T6 中 PTEN 高***化,5-AzadC 能使高***化的 PTEN 去***化进而恢复 P