文档介绍：GnRH Gonadotropin-releasing hormone 促性腺激素释放激素
甾体受体共同活化蛋
SRC-1 Steriod receptor coactivator-1 白 1
AREs Androgen-response elements 雄激素效应元件
EGF Epidermal growth factor 表皮生长因子
BPH Benign prostatic hyperplasia 良性前列腺增生症 ELISA Enzyme-linked immunosorbnent assay 酶联接免疫吸附测定 PIN Prostate intraepithelial neoplasia 前列腺上皮内肿瘤
STAT3 Signal transducers and activators of
transcription-3
信号传导及转录激活
因子 3
EpCAM 与雄激素非依赖性前列腺癌
发生的相关性研究
博士研究生 :杨 帆
导 师 :袁建林 教 授辅导教师:王福利 副教授
第四军医大学西京医院泌尿外科,西安 710032
资助基金项目:国家自然科学基金(NO30872583,NO81072116)
中文摘要
雄激素抵抗性前列腺癌是前列腺癌致死的主要原因。关于雄激素抵抗性前列腺癌发病机制的研究目前已经成为前列腺癌研究的热点之一。上皮细胞黏附分子(Epithelial cell adhesion molecule ,EpCAM)是一类 I 型跨膜糖蛋白,其在正常组织中只局限性的表达在上皮组织的基底膜处,但在快速增殖的肿瘤细胞中则大量表达。EpCAM 在肿瘤组织中的过度表达与肿瘤的发生、发展及预后密切相关,已经成为肿瘤诊断和靶向治疗重要的候选分子。关于 EpCAM 在前列腺癌组织中的表达与雄激素抵抗性前列腺癌的发生相关性的研究目前还鲜有报道。
本研究利用免疫组织化学和前列腺癌组织芯片技术在 6 例正常前列腺组织、24 例前列腺增生组织及 210 例前列腺癌组织中检测了 EpCAM 蛋白的表达差异。结果显示:EpCAM 蛋白在正常前列腺组织表达量较低且主要局限性表达在前列腺管腔上皮细胞的基底膜处,在管腔上皮的细胞间连接处仅有极少量表达。在前列腺增生组织中,EpCAM 的表达量增高,其表达不仅在管腔上皮组织的基底膜处且在管腔上皮细胞间连接处表达量也较高。在前列腺癌组织中,EpCAM 的表达量显著升高, 且弥散的表达在前列腺管腔上皮细胞的各个部分,除了上皮细胞的基底部和细胞间
连接处有大量的表达以外,在管腔上皮细胞的顶端也有大量的表达。Western-blot
在前列腺癌组织及相应的癌旁组织中检测 EpCAM 的表达,结果进一步肯定了其在前列腺癌组织中的表达量显著高于癌旁组织。统计学分析结果显示:EpCAM 蛋白的高表达与前列腺癌的临床病理分级、淋巴结转移、远处转移以及手术前血清中总的前列腺特异性抗原(Prostatespecific antigen,PSA)水平等具有明显相关性,且 EpCAM 高表达的前列腺癌患者,其无转移生存期和总生存期均显著短于 EpCAM 低表达的前列腺癌患者。
Western-blot 检测四种前列腺癌细胞系 DU-145,PC-3,LNCaP 及 VCaP 中 EpCAM 的表达,结果显示:LNCaP 细胞中 EpCAM 的表达量最高,其次为 PC-3 细胞、DU-145 细胞和 VCaP 细胞。采用 shRNA 干扰技术即利用 EpCAM-shRNA 慢病毒颗粒及相应的慢病毒 shRNA 载体颗粒感染前列腺癌 LNCaP 细胞并建立稳定转染的细胞系 EpCAM-shRNA5 和对照细胞系 Vector 3。在 EpCAM-shRNA5 和 Vector 3 细胞中分别检测雄激素受体(Androgen receptor,AR)及 PSA 的表达水平,结果显示:EpCAM-shRNA5 细胞中,AR 和 PSA 的表达水平明显低于 Vector 3 细胞。 ELISA 法检测 EpCAM-shRNA5 细胞培养上清中的 PSA 水平同样低于 Vector 3 细胞。 MTT 法、TUNEL 法、Annexin V/PI 双染法、细胞划痕实验以及 Transwell 实验分别用来在体外检测 EpCAM-shRNA5 和 Vector 3 细胞的增殖、抗凋亡、迁移以及侵袭能力,结果显示 EpCAM-shRNA5 细胞的增殖、抗凋亡、迁移以及侵袭能力均显著低于对照组 Vector 3 细胞。采用小鼠体内肿瘤种植模型进一步在体内检测两种细胞的肿瘤形成能力,结果显示 EpCAM-shRNA5 细胞的体内成瘤能力明显低于 Vector 3 细胞。我们的研究结果提示