实验四 同工酶分析PPT幻灯片.ppt

文档介绍：1
实验四过氧化物同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析
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(1)掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术的原理和操作方法。
(2)掌握PAGE法分离过氧化物同工酶的原理和方法。
一、实验目的
二、实验原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
过氧化物同工酶及活性染色
二、实验原理
1、电泳概念:带电粒子在电场中向与其电性相反的电极移动的现象。
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二、实验原理
2、电泳分类:
显微电泳
自由界面电泳
区带电泳
纸电泳
醋酸薄膜电泳
琼脂糖凝胶电泳
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
二、实验原理
3、电泳法原理:在一定条件下,任何带点颗粒都有自己特定的电泳迁移率。影响电泳迁移率的因素:
颗粒性质:净电荷数目、颗粒大小、颗粒形状
电场强度:V/cm
溶液性质:缓冲液的pH、离子强度、溶液黏度、电渗
二、实验原理
4、聚丙烯酰胺凝胶电泳:是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在加速剂 N,N,N,N-四甲基乙二胺(TEMED)和催化剂过硫酸铵(AP)的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶,以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,简称PAGE)
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Bis将单体长链间连成网状结构:
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PAGE法分离蛋白质的三种效应:
电荷效应:各种蛋白质分子所带电荷不同,在同一电场中泳动率不同;
分子筛效应:蛋白质分子大小和形状各不相同,在通过一定浓度(一定孔径)凝胶时受阻力各不相同,泳动率也不相同;
浓缩效应:凝胶为不连续系统(凝胶层、pH、电位梯度均不连续),从而使样品浓缩在一个极窄的起始区带,即所谓浓缩效应,提高了条带分辩率。(只有不连续凝胶具有此效应)