文档介绍：HPLC的保养和故障排除
HPLC的日常操作条件
最好是恒温、恒湿
温度:15—30℃
相对湿度<80%
房间应有良好的通风
空调或其他设备产生的气流不要直吹仪器
避免光线直射
远离高电干扰、高振动设备
泵的使用与维护注意事项
防止任何固体微粒进入泵体()
流动相不应含有任何腐蚀性特质,含有缓冲液的流动相不应保留在泵内
泵工作时防止溶剂瓶内的流动相用完,否则空泵运转也会磨损柱塞、密封圈,最终产生漏液
输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力
流动相应先脱气,以免在泵内产生气泡,影响流量的稳定性
流动相的选择
采用“HPLC”级溶剂
对试样有适宜的溶解度
溶剂粘度要小
与检测器相匹配
溶剂的等级
HPLC级
优级纯
分析纯
溶剂等级
微量分析、梯度洗脱
(除纤维毛,未溶解的机械颗粒)
优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂
,且除去有紫外吸收的杂质
溶剂纯度的影响
溶剂中的杂质会导致出现“鬼峰”,特别是梯度解吸时
注意: 只能使用色谱级的溶剂!
不能使用旧的或未经过滤的缓冲溶液
缓冲液的使用
缓冲液的使用
使用前必须过滤
使用后一定要进行清洗,以免造成腐蚀、磨损、阻塞:
第二天接着用:用20%甲醇:80%水冲洗20-30分钟
隔几天再用:用甲醇:水冲洗后,再用纯甲醇冲洗
易受到细菌和霉菌的影响
不能直接用有机溶剂冲洗
流动相的过滤
过滤:
目的:除去溶剂中的微小颗粒,避免堵塞色谱柱,尤其在使用无机盐配制的缓冲液时
过滤膜种类
水系过滤膜
水系滤膜严禁用于有机溶剂,否则滤膜会被溶解
有机系过滤膜
脱气
目的:除去流动相中因溶解或混合而产生的气泡
产生原因:
温度上升
压力下降
溶剂混合
流动相的脱气
流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯容器中,不能贮存在塑料容器中。
容器一定要盖严,防止溶剂挥发引起组成变化,也防止氧和二氧化碳溶入流动相。
磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉,应临用现制。
容器应定期清洗,以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。
流动相的贮存