文档介绍：一氧化氮及一氧化氮合酶在兔脑缺血再灌注损伤中的作用
【关键词】脑缺血再灌注
【摘要】目的:探讨一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS):采用阻断双侧颈总动脉30min的方法建立急性兔前脑缺血模型,:脑缺血再灌注过程中NO,NOS呈“双峰样”,缺血60min时两者下降;分别在脑缺血后30min和60min再灌注时,:NO和NOS通过多种途径参与了脑缺血再灌注损伤的病理过程.
【关键词】脑缺血再灌注;一氧化氮;一氧化氮合酶
0引言
一氧化氮(NO)是生物体内近年来颇受关注的、新型的细胞信息分子,广泛参与机体心血管、免疫、(NOS):即神经元型(nNOS)、内皮型(eNOS)和诱导型(iNOS).OS),是生理存在形式,依赖Ca2+或钙调蛋白,作用快速短暂,,作用时间长,NO产生较多[1].近年来研究发现,NO在脑缺血损害中发挥重要作用[2],但在缺血再灌流情况下,脑组织中NO含量及NOS活性有何变化,,观察兔急性前脑缺血再灌注时脑组织NO含量和NOS活性的变化,探讨了NO,NOS在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制.
1材料和方法
筛选健康新西兰白兔30只(南阳高等医学专科学校动物中心提供),3~4月龄,~,雌雄兼用,随机分为假手术组、缺血30min组、缺血30min再灌注30min组、缺血60min组、(略)
动物用25g/L戊巴比妥钠(1mL/kg)iv麻醉,固定于兔手术台上,颈部正中切口,分离双侧颈总动脉,用无损伤微动脉夹夹闭双侧颈总动脉30min(或60min),此为缺血期;30min(或60min)后撤去双侧动脉夹,:即夹闭双侧颈总动脉10s左右,兔出现意识丧失、角膜反射和翻正反射消失,并在30min缺血期内,意识和上述反射均未恢复者,,,,加冰生理盐水制备100g/,4
℃下离心20min,取上清液置-20℃-,NO3-,故采用***还原酶法,特异性地将NO3-还原为NO2-,后者与Griess试剂反应生成紫红色化合物,:每克组织蛋白每秒生成1nmolNO为nkat/[3].
3讨论
NO是由L精氨酸和分子氧在NOS催化下生成的,是一种正常生理状态下存在的信息分子,在维持神经元功能的完整性、:由于NO在生物体内的浓度、产生部位和时间、作用部位的不同及其氧化还原状态等复杂的生物学性质,决定其在中枢神经系统中,既有潜在的脑保护又有神经毒性的双重作用,犹如一把“双刃剑”.NO可激活鸟苷酸环化酶,使平滑肌细胞cGMP增多,舒张脑血管、调节脑血流[1];控制血小板聚集和黏附[3,4];氧化状态的NO,能调节离子通道,减少胞质游离Ca2+,导致膜功能失调;过量的NO又可通过多种信号转导途径引起神经损害,,,兔脑缺血再灌注过程中,脑组织NO含量和NOS活性呈独特的“双峰样”改变,该结果与Tominaga在大鼠局灶性脑缺血模型上,利用电子偏振磁共振技术测定结果相似.
在脑缺血早期,由于神经末稍释放兴奋性氨基酸增多,激活N***D天门冬氨酸受体(NMDA),使细胞内Ca2+超载,依赖Ca2+或钙调蛋白的NOS持续激活[5];其次,脑缺血缺氧时,ATP耗竭,能量代谢障碍,cAMP依赖性蛋白激酶活性下降,使NOS脱磷酸化而活性增强,合成NO增多,致NO含量和