文档介绍：———嘞北京国际会议中心绷┧簧局频缡憎肀到蓬炊谏镟ㄕ憾旌寡宓核扇懦聊琒基因对百草枯致小鼠肺问质纤维化的保护作用中国医科大学附属第一医院急诊科口董雪松孙裕强刘志关键词:百草枯;中毒;籖干扰;腺病毒;肺间质纤维化一、实验材料和方法摘要:目的通过扇懦聊∈蠓巫橹蠸基因,观察其对百草枯致肺间质纤维化是否具有保护作用。方法利用小鼠成纤维细胞,验证抑带虮泶锏挠行,并进一步将其合成进重组腺病毒。在小鼠百草枯染毒后,气管内分别注入⒎前邢蛑刈橄俨《竞桶邢蛑刈橄俨《尽=峁琍组、非靶向重组腺病毒组相比,靶向重组腺病毒有效抑制了肺组织偷鞍妆泶铩V刈橄俨《窘榈嫉膕转染进一步抑制了肺组织中型前胶原表达和羟脯氨酸的产生,减轻了百草枯所致的肺间质纤维化的形成。结论园俨菘菀鸬姆渭渲纤维化中有重要作用。通过扇乓种品巫橹疭基因转录后表达可能是一种有效的治疗该病的方法。百草枯琍,又称克无踪、对草快,属于有机杂环类接触性脱叶剂及除草剂。化学名称是’一二甲基一一’联吡啶,分子式为·W昶穑俨菘葑魑3菁劣τ糜谂┮挡⒌玫窖杆偻乒悖目前在中国农村应用非常广泛。但人和动物摄入百草枯后,会表现出强烈的毒性。我国常可见到百草枯中毒病例,即使食入少量百草枯,也表现出极高死亡率,个别报道高达%以上。百草枯可引起多脏器损伤,但以肺损伤最为突出。肺损伤表现为肺水肿、炎症细胞浸润、肺泡出血、成纤维细胞增生和胶原沉积0俨菘葜卸净颊吡俅脖硐址治A礁鼋锥危涸缙诨颊咴谥卸臼炷谒烙诩毙院粑狡茸酆险骱多脏器功能衰竭。早期存活下来的患者将逐渐出现不可逆的肺间质纤维化并在数周内死亡。个别幸存的病人由于存在肺间质纤维化,也严重其影响生存质量】。转化生长因子一可以诱导胶原合成和基质改变,在各种类型的肺间质纤维化中都具有重要的作用,被称为纤维化进程的“开关因子”,引。在百草枯中毒的早期,就可检测到偷鞍妆泶镌銮縖改甑难芯勘砻鳎琓一藕攀峭ü齀、型丝氨酸/苏氨酸激酶受体进行传导。激活的芴辶姿峄掠蔚男藕欧肿樱芴寮せ钚偷腟蛋白和。它们将与岷希录入核,调节Υ鸹虻淖B迹鹣宋喙氐母谋鋄引。其中谋泶镌诜蜗宋衅鹬匾W饔】。敲除男∈蠖圆├疵顾赜盏嫉姆渭渲氏宋硐殖黾ù蟮牡挚梗崾疽种品巫橹蠸基因表达对药物性肺纤维化有治疗作用叫。扇琑是一种新的技术手段,能在体内或体外特异性的抑制靶基因的表达。主要通过在转录后水平阻断基因的表达,因此又称为转录后基因沉默【小F渥饔弥饕J峭ü齞被核酸酶切割成—的干涉性的小的碨,由侗鸾榈疾邢蚯懈钔葱缘陌衜肿邮迪值摹哂懈咝院高度特异性等特点。目前发展的载体表达鶲短发夹,既避免了引起干扰素应答,有允许组织特异性的抑制基因表达,使更方便进行哺乳动物水平的实验研究和基因水平的治疗。腺病毒作为基因载体能感染绝大部分细胞,是体外进行基因沉默的有效载体¨,对肺组织中的上皮细胞和间质细胞具有很好的转染率。本实验通过重组腺病毒携带聊俨菘萑径拘∈蠓巫橹械腟基因,观察其对肺间质纤维化形成的保护作用。逋馐笛,狟一
一北京国际会议中心一闹票负驮靥宓墓菇根据小鼠一嗦攵谭⒓凶B夹蛄校杓萍:表谭⒓蠷的序列和定位其中,沉默膕序列都已通过基因银行数据库的砑阉鳎员苊馔渌蛴邢嗨的序列,但同已知的小鼠蛐蛄%同源。委托武汉晶赛生物技术公司编码短发夹合成进质粒。通过细菌克隆对质粒进行扩增,阳性的克隆被进一步通过测序鉴定。质粒载体沉默虻有效性在体外培养的细胞中检验。细胞培养和转染实验使