文档介绍：壶腹周围肿瘤染色体9p21缺失图谱的构建
【摘要】目的: 进一步限定壶腹周围肿瘤染色体9p21区域的缺失范围. 方法: 选择染色体9p21区域5个微卫星多态性标记,通过聚合酶链反应、聚丙烯酰***凝胶电泳和银染法,检测35例壶腹周围肿瘤及其外周血杂合性丢失(LOH)状况. 结果: 50%(4/8)胰腺癌有至少一个微卫星位点的LOH,其中D9S974(%)和D9S942(%)丢失频率较高,%(5/8)壶腹癌在部分或全部位点出现LOH,其中D9S942(%)丢失频率最高,其次为IFNA(%)和D9S171(%).%(1/7)胰岛素瘤有一个位点LOH. 结论: 壶腹周围肿瘤染色体9p21最小共同缺失区位于D9S974和D9S942位点之间,其中可能存在一个新的涉及该肿瘤发生的相关抑癌基因.
【关键词】肝胰管壶腹;胰腺肿瘤;染色体,人,9对;染色体图;遗传标记
0引言
壶腹周围肿瘤包括胰腺癌和壶腹的各种良、恶性肿瘤. 已知染色体9p21区域等位基因杂合性丢失(loss of heterozygosity, LOH)是多种肿瘤中的共同事件. 虽然p16基因已在染色体9p21区域被定位和克隆,但其在胰腺癌细胞系中的失活频率远高于原发性胰腺癌[1]. 在9p21区域IFNA和D9S171位点之间,集中了等位基因缺失的常见区域. 为证实或发现与9p连锁的胰腺癌相关抑癌基因,我们在p16基因周围4 cM的范围内选择了5个微卫星多态性标记,对壶腹周围肿瘤和正常组织进行LOH分析.
1材料和方法
材料壶腹周围肿瘤组织标本35例来自北京协和医院基本外科胰十二指肠切除术(ol/L NaCl,10 mmol/L Tris·HCl(),25 mmol/L EDTA,5 g/L SDS),蛋白酶K消化,酚、***仿∶异戊醇(24∶1)抽提,无水乙醇沉淀,最后溶于TE缓冲液(10 mmol/L Tris·HCl,1 mmol/L EDTA, ),浓度约1 μg/μL,4℃保存.
:IFNA,D9S974,D9S942,D9S1748和D9S171,均为2核苷酸重复序列,用于聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR).
25 μL反应体系中,含基因组DNA 500 ng,10× μL, mmol/L dNTP, μmol/L上、下游引物,~2单位. PCR反应条件:95℃预变性2 min,95℃ 50 s,复性30 s~40 s,70℃ 1 min,经30~35个循环,最后72℃延伸5 min,4℃保存.
***凝胶电泳取PCR扩增产物3~5 μL,用凝胶加样缓冲液(980 mL/L甲酰***,10 mmol/L EDTA(), g/L二甲苯青, g/L 溴酚蓝)稀释1~3倍,95℃变性10 min,上样于60 g/L变性聚丙烯酰***凝胶(含7 mol/L尿素),50℃,600 V,电泳约2 h. 凝胶银染,观察结果.