文档介绍：呋喃唑酮代谢物(AOZ)ELISA检测试剂盒说明书
一、概要
用来检测呋喃唑酮代谢物的最常用方法是LC-UV,LC-MS和LC-MS/MS。酶联免疫方法结合了色谱技术,采用AOZ衍生物的特异性抗体,具有很高的准确度和灵敏度,较低的操作技术要求和短暂的检测时间,检测样本量大等特点在检测中很好的表现出来。(。)
二、试验原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被偶联抗原,样本中的残留的AOZ经衍生化后和酶标板微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗呋喃唑酮代谢物的衍生物抗体,加入酶标二抗后,用TMB底物显色,样本吸光值与其所含残留物AOZ的含量成负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中呋喃唑酮代谢物的残留量。
三、适用范围
可定性、定量检测动物组织(鸡、猪、牛等)、牛奶、蜂蜜和鸡蛋样本中的呋喃唑酮代谢物的残留量。
四、交叉反应率
呋喃唑酮代谢物…………………………………… 100%
呋喃它酮代谢物…………………………………小于 %
呋喃妥因代谢物…………………………………小于 %
硝基糠腙(呋喃西林)代谢物…………………%
呋喃唑酮…………………………………………………%
呋喃它酮………………………………………………小于1%
呋喃妥因………………………………………………小于1%
硝基糠腙(呋喃西林)………………………………小于1%
五、使用单位需自备的设备及试剂
设备:
┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm
┅┅旋转蒸发仪/氮气吹干装置
┅┅均质器
┅┅振荡器
┅┅涡旋仪
┅┅离心机
┅┅天平:
┅┅刻度移液管:10ml
┅┅洗耳球
┅┅容量瓶: 100ml、1L
┅┅玻璃试管:10ml
┅┅聚苯乙烯离心管:2ml、10ml、50ml
┅┅微量移液器:单道 20ml~200ml、100ml~1000ml
多道 250ml
试剂:
┅┅乙酸乙酯(分析纯)
┅┅正己烷(或正庚烷)(分析纯)
┅┅三水合磷酸氢二钾(分析纯)
┅┅浓盐酸
┅┅氢氧化钠(分析纯)
┅┅二水合亚硝基铁氰化钠()5·NO·2H2O)(分析纯)(供奶、鸡蛋样用)
┅┅七水合硫酸锌(ZnSO4·7 H2O) (分析纯)(供奶、鸡蛋样用)
┅┅去离子水
六、提供的材料与试剂
1、96孔酶标板×1块(包被有偶联抗原)
2、标准液×6瓶:(1ml/瓶)
0ppb,,,,, 3、高浓度标准品:(1ml/瓶) 100ppb
4、酶标二抗浓缩液 ……………………红色帽
5、抗体浓缩液 ……………………绿色帽
6、底物液 A 液 7ml ……………………白色帽
7、底物液 B 液 7ml ……………………红色帽
8、终止液 7ml ……………………黄色帽
9、20×浓缩洗涤液 40ml………………………透明帽
10、2×浓缩复溶液 50ml……………………蓝色帽
11、2-硝基苯甲醛 ……………………黑色帽
七、溶液的配制
配液1: 衍生化试剂
向装有2-硝基苯甲醛的试剂瓶中加甲醇溶解定容至10ml(浓度为10mM)。
配液2:
。
配液3: C液(供奶样、鸡蛋用):
()5·NO·2H2O)溶液
亚硝基铁氰化钠加去离子水溶解定容至100ml
D液(供奶样、鸡蛋用):
1M硫酸锌(ZnSO4·7H2O)溶液
硫酸锌用去离子水溶解定容至100ml
配液4: 1M盐酸溶液
。
配液5: 1M 氢氧化钠溶液
。
配液6: 复溶工作液
用去离子水将2×浓缩复溶液按1:1体积比进行稀释(1份2×浓缩复溶液+1份去离子水)用于抗体浓缩液、酶标二抗浓缩液的稀释及提取样本的复溶,复溶工作液在4℃环境可保存一个月。
配液7: 洗涤液工作液
用去离子水将20×浓缩洗涤液按1:19体积比进行稀释(1份20×浓缩洗涤液+19份去离子水)用于酶标板的洗涤,洗涤工作液在4
℃环境可保存一个月。
八、样本前处理步骤
样本处理前须知
处理任何样本时,都必须注意:
(a)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。
(b)实验之前须检查各种实验器具是否洁净,必须使用洁净实验器具,以避免污染