文档介绍：安徽医科大学
硕士学位论文

达
姓名:周正春
申请学位级别:硕士
专业:外科学(心胸外科)
指导教师:葛建军;周汝元
20050501
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学位论文使用授权声明学位论文独创性声明位论文的内容编入有关数据库进行检索,有权将学位论文的标题和摘要汇编出本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确说明并表示谢意。学位论文作者签名:本人完全了解安徽医科大学有关保留、使用学位论文的规定。学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版,有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅,有权将学版。保密的学位论文在解密后适用本规定。.学位论文作者签名:导师签名:期:日期://日//、
。临床上冠心病的治疗还远未达到令人满意的效果,由于相当一部分冠心病不适宜冠状动脉搭桥术、血管内成形术及心肌内激光打孔等治疗,例如广泛冠近年来,随着基因重组技术的发展,一种从分子水平治疗缺血性心脏病的新方法即分子搭桥术逐渐受到了人们的重视。所谓“分子搭桥术”又称“血管新生疗法”是指通过应用血管生长因子或其基因,促进缺血周围组织的血管新生和侧枝血管形成,使缺血得到改善的一种治疗方法。常被用于心肌和肢体的缺血坏死的治疗成素。其中,血管内皮生长因子是内皮细胞特异性最强的有丝分裂原。的生物学功能有俳9苌珊脱9芊⑸淳哂杏兴糠至言钚裕以改变细胞外基质促进血管新生作用。黾友9芡ㄍ感浴能够维持血管正常状态及完整性功能。另外,还有心脏缺血区的细胞移植,也可促进血管新生。在心肌损伤的情况下,如心肌梗塞后,坏死的心肌细胞往往被成纤维细胞所替代而成为瘢痕组织,通过在病损的心肌处直接诱导心肌细胞的增殖来提高心功能可能是一种最直接的治疗方式,但因成年哺乳动物的心肌内没有干细胞,因而心肌组织缺乏增殖和再内移植的方法而进行的细胞心肌成形术,为病损的心肌提供了修复的可能性。此类细胞包括骨骼肌成肌细胞、平滑肌细胞、心肌细胞和干细胞。,在欧美国家已是第一位的致死原因,在我的提高,冠心病的发病率也呈上升趋势,严重威胁人类状动脉弥漫性狭窄病变,以及术后高达%~%的再狭窄率目前尚无解决办法。研究。这类因子主要包括:血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子和促血管生生能力,故在目前此法还是不可行的。随着心肌组织工程学的发展,通过细胞体血损伤处的疤痕从而改善心功能。养小鼠心肌细胞,∠赴械谋泶铮荚谖9谛牟安徽医科大学硕士学位论文.
的基因治疗和细胞移植治疗研究奠定基础。方法第一部分:∽橹刑取总宰躌为模板逆转录合成第一链,设计合成引物,应用实获得全长基因片段,共盖泻罂寺∪,,台盼蓝染色行细胞活率测定,用心肌肌球蛋白的重链抗体进侍褰榈,分别用、免疫组化、和结果方法从胎儿心肌组织获得正确的基因序列,。培养的心肌细胞能自发搏动,纯度达%,台盼蓝染色细胞活率达%,细胞免疫化学染色呈阳性。.痟H拘∈笮募∠赴笤谧B妓健⑾赴诘鞍字仕健⒑蜕清中的蛋白质水平均可检测到目的基因的表达。⒃嘌小鼠一心肌细胞能够表达蛋白。培养的心肌细胞可以作为移植细胞,用于缺血性心脏病的治疗研究。关键词血管内皮生长因子基因克隆逆转录聚合酶链反应基因表达小鼠心肌细胞细胞培养免疫化学扩增,获得基因,将其重组入靥澹琍法鉴定并测序,证将其转染细胞,方法检测谋泶锏鞍住5谝部分,小鼠心肌细胞的原代培养和鉴定。取新生的昆明小鼠,无菌条件下取出心脏,ヒ让赶琁嘌含%胎牛血清和双抗生素嘌耘行细胞免疫化学鉴定。第三部分,.痟刈樘遄H拘∈笮募∠赴方法检测在转录水平、细胞内蛋白质水平、和上清中的蛋