文档介绍：三、血红蛋白测定
(一)血红蛋白的结构
血红蛋白结构: 由珠蛋白和亚铁血红素结合组成。
Hb
色素部分:亚铁血红素
蛋白质部分:珠蛋白
Fe 2+
原卟啉
空间结构:每个血红蛋白有4条珠蛋白肽链,
每条肽链包裹1个亚铁血红素,形成具有
四级空间结构的四聚体。
【分类】(每个珠蛋白分子含两条α链和两条非α链)
正常人:HbA ( α2β2) 占90% ***主要血红蛋白;
HbA2( α2δ2 ) 占2%-3% ***次要血红蛋白
HbF ( α2γ2 ) 占2%以下胎儿主要血红蛋白
生理情况下,99%Hb的铁呈Fe2+状态,称为还原血红蛋白,亚铁状态的Hb与氧结合称氧合血红蛋白(HbO2).
1%Hb的铁呈Fe3+状态,称为高铁血红蛋白(Hi)。
Hb的合成受激素的调节:Epo和雄激素。
注意事项:1. 如α-链或β-链合成障碍,使三种正常血红蛋白比例异常,即各型地中海贫血;如多肽链发生氨基酸置换、丢失、加长,称为血红蛋白病。
(SHb)。
(二)血红蛋白衍生物及其吸收光谱
(oxyhemoglobin, HbO2):Hb与O2结合时形成。
(reduced hemoglobin, Hbred):未与O2结合时的Hb。
(hemiglo -bin, Hi)或正铁血红蛋白(methemoglobin, Mhb): Fe 2+被氧化成Fe 3+。
(HbCO)、硫化血红蛋白(SHb):与O2结合的配位键被CO、S等占据。
5.***化高铁血红蛋白():-结合而成。波峰540nm,波谷504nm。
正常情况下,血液中血红蛋白主要是HbO2和Hbred,以及少量HbCO和Hi。
(三)血红蛋白测定方法
手工法:
法
SDS-Hb法
AHD575法
HiN3法
血液分析仪法
1、***化高铁血红蛋白()测定法
1)原理:在Hb转化液中,除SHb外,Hb被高铁***化钾氧化成高铁血红蛋白,-结合,生成稳定的棕红色***化高铁血红蛋白(),吸收峰为λ540nm,毫摩尔消光系数为44 L·mmol-1 ·cm -1 。因此根据标本的吸光度,即可求得血红蛋白总量(不含SHb)。