文档介绍：安徽医科大学
硕士学位论文
TNF-α、胰岛素和地塞米松对稳定表达人脂联素3T3-L1细胞
PPAR-γ2mRNA表达的影响
姓名:佘其美
申请学位级别:硕士
专业:内科学(内分泌及代谢性疾病)
指导教师:王长江;王佑民
20050501
缩写词表脂联素吞悄虿脂肪富有基因转录单位脂肪细胞补体相聚合酶链反应焦碳酸二乙酯噻唑烷二酮类血管细胞粘附分子一種终端激酶游离脂肪酸血浆纤容酶原激活物抑制凝胶结合蛋白关蛋白互补脱氧核糖核酸逆转录培养基已二胺四乙酸光密度肿瘤坏死因子一过氧化物酶体增殖体激活受患《活化蛋白激酶反应元件维甲酸受体安徽医科大学硕士学位论文..·產·篈畄
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铷签名:廖勿靠兰雾学位论文作者签名:名善多学位论文独创性声明学位论文使用授权声明.∥,学位论文作者签名::,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已本人完全了解安徽医科大学有关保留、使用学位论文的规定。学校有权保留,学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版,有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅,有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索,。日期:日
第一部分重组脂联素真核表达质粒的构建及在细胞中表达关键词:脂联素转染质粒摘要目的:构建重组人脂联素婧吮泶镏柿#⑽榷ㄗH一细胞,为进一步研究脂联素的功能提供实验基础。方法:,经酶切和核苷酸序列测定鉴定。脂质体法转染甃赴珿,凝胶电泳鉴定总柿浚贤夥止夤舛燃品ḿ觳庾躌的纯度和浓度。根据报道的人脂联素基因序列,用计算机软件设计特异性引物,以总模板,通过的方法逆转录合成脂联素基因片段。结果:重组真核表达质粒经核苷酸序列测定证实。总缬厩逦允、醮约产物经凝胶电泳后于紫外分析仪下可见在因片段长度恢隆=崧郏撼晒Φ毓菇巳酥刈橹K卣婧吮泶镏柿2⒃籐赴形榷ū泶铩回收目的基因片段与线性化的真核表达质粒,经连接、转化大肠杆菌筛选埽粞⊙粜韵赴寺±┰觯碦僮魉得鞔酉赴刑崛∽,大小与理论值一致。并,/.砻魈崛〉淖躌纯度高,其浓度为前有一清晰条带,和扩增目的基经、安徽医科大学硕士学位论文痬琑
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第一部分蛑刈檎婧吮泶镏柿5墓建及在籐赴斜泶把牧嫌敕椒脂肪细胞内分泌功能的发现,彻底改变了过去只把脂肪组织看作被动的燃料贮存库或组织器官充填料的传统关点,现在认为脂肪细胞在吞悄虿〉姆⑸衅脂联素等与细胞功能障碍及胰岛素抵抗有密切的关系VK厥且恢种咀织特异性分泌的血浆糖蛋白,可用缀头ù友=蟹掷胩崛。室渤K谘=信ǘ仁/,占总血浆蛋白ァ=昀矗捎其在肥胖和吞悄虿≈械淖饔迷嚼丛绞艿饺嗣堑墓刈ⅲ晌Q芯康娜鹊恪人的脂联素基因定位于人染色体保ǔぴ个外显子和两个馗葱蛄械某’不转录序列。基因的内含子和外显子序列类似于肥胖基因编码的瘦素基因;虻牡鹘谛蛄邪ḿ俣ㄆ舳釉<挥械湫蚑小F浠因临近启动子区琍从υ<,包含一个氨基术端信号序列、一个小的非螺旋区、一段个胶原重复延伸序列和一个球形区域【研究已发现脂联素具有调节体内能量平衡,改善脂代谢、糖代谢、胰岛素敏楚,本研究是构建重组脂联素真核表达质粒,并稳定转染到甃赴=徊研究脂联素的功能及调控机制提供实验基础。主要作用。脂肪细胞分泌的多种细胞因子如:瘦素、肿瘤坏死因子.⒌挚顾亍内含子组成。两个内含子分别是和,三个外显子包含有一个含有感性及抗炎症作用和抗动脉粥样硬化作用【玂W饔玫姆肿踊颇壳叭圆煌耆安徽医科大学硕士学位论文
.康幕蚣跋赴载有人全长脂联素编码区的重组克隆质粒甌/。
液体培养基胰蛋白胨酵母提取物充分混匀,用调整至,液体培养基固体培养基,室温下使其固化,高压