文档介绍：甘肃不同产地当归ITS序列分析
【关键词】当归;ITS;序列分析;道地性;甘肃
Abstract:Objective To establish the basis of molecular systematics of Angelica from different areas of Gansu province so as to offer molecular basis of identification Gansu-produced Angelica . Methods The ITS gene of Angelica ong different specimens. Results The ITS sequence of Angelica betens have same bases at 586 site en, ens are “T” and “G” respectively. Conclusion The ITS sequence characteristics can be recognized as effective molecular marker of Angelica, and both 586 site base and 589 site base of the ITS sequence of Angelica can be recognized as identification bases of Min County-produced Angelica.
Key ;Gansu
当归为伞形科多年生草本植物当归[Angelica sinensi (Oliv.)Diels]的干燥根。我国当归主产于甘肃东南部,以岷县产量多、质量好,其次为云南、四川、陕西、湖北等省,均为栽培。甘肃产的当归,个大质优,称“秦归”或“西归”,销往全国并大量出口。药材道地性研究已经成为中医药科研的重要课题,但由于道地药材与非道地药材在形态和生药上基本一致,所以传统方法亦不能满足道地药材的现代研究。道地药材是一个地域性现象,其产生除了与栽培方法、生态环境、加工方法有关外,还与物种居群的遗传特异性有关。在植物系统与进化研究中,核酸分子量是最基本的进化单位,能反映进化本质;核酸的基本序列是一元变化的,通常为点突破,趋同效应极小,以核酸分子为指标确定的系统化关系不受主观因素影响。所以,近些年分子鉴定技术在中药研究中不断应用,此方法也已成为中药材道地性研究的重要手段。ITS序列作为种以下分子鉴定的重要序列,其在中药道地性研究中也得到了广泛研究。
1 材料与方法
药材
本试验所用药材均为2005年采自甘肃省岷县及漳县地区农民种植的当归种子, 自然干燥后备用,经甘肃中医学院张西玲教授鉴定。见表1。表1 甘肃不同产地当归药材(略)
ITS序列扩增
以已经发表于genebank中的当归ITS序列为标准,设计一对引物,引物序列为:ITS正,5’-TGCAATAGC; ITS反,5’-TCGAAGCGCACAGAGTATG(引物由上海生物工程技术服务有限公司合成)。PCR反应采用上海生物工程技术服务有限公司提供的即用型PCR扩增试剂盒,反应体系为50
μL,其中2×Master 25 μL,上下游引物各5 μL