文档介绍：外源雌激素处理对唐鱼卵黄蛋白原和雌激素受体基因表达的影响
张为民
中山大学生命科学学院
唐鱼(Tanichthys albonubes)
雄鱼
雌鱼
唐鱼
唐鱼为鲤科(Cyprinidae)鱼丹亚科(Danioninae)唐鱼属(Tanichthys Lin, 1932)
仅分布于我国广州白云山一带山区小溪流中,濒危物种,属国家II级保护动物
研究表明唐鱼对重金属Cu 2 + 等敏感,是一种较理想的环境重金属污染指示生物
Question
唐鱼对环境雌激素污染是否也敏感?
卵黄蛋白原
卵黄蛋白原(VTG)是卵生动物中卵黄蛋白(yolk protein)的前体,由1100多个氨基酸组成
VTG经蛋白酶水解产生:卵黄脂磷蛋白I (lipovitellin I),卵黄高磷蛋白(phosvitin),和卵黄脂磷蛋白II ( lipovitellin II)
在鱼类、两栖类和鸟类中, VTG是在E2刺激下由雌性动物肝脏中合成的
雄鱼肝脏在E2刺激下也能合成VTG
雌激素受体
广义的雌激素受体(estrogen receptor,ER)包括雌激素膜受体、胞质受体和核受体
雌激素核受体介导雌激素的基因组效应
E2刺激VTG生物合成是由雌激素核受体介导的
环境雌激素也可作用在雌激素核受体上影响动物内分泌平衡
目的意义
克隆唐鱼VTG和雌激素受体基因
分析E2对雄性唐鱼这些基因表达的影响
方法
基因克隆采用3’和5’RACE方法
基因表达分析采用半定量RT-PCR方法
VTG: Nucleotide and deduced amino acid sequences
1 TTGTGGCGAGTC
1 M R A V V L A P T V A L V A S Q
61 TATGTGTACAAGTATGAGG
17 Q I S L V P E F A S D K T Y V Y K Y E A
121 TCAAGAAGGTCTGGCTAGAGTCGGAGCAAAAGTCAACG
37 L H L G G L P Q E G L A R V G A K V N G
181 TTTCTGATGAAGTTCTCAGATGTTC
57 K V Y I R A E T E S T F L M K F S D V Q
241 TGAAACTAAGCTCA
77 L H E Y T G I W P R D P F V P E T K L M
301 AATGGTGTGG
97 S T M T A E L Q I P I K F E Y T N G V V
361 TATTGTTCTGAACTTTTACAGAGGAA
117 G K I F A P A G V S P I V L N F Y R G I
421 AGAACATCTATGAGCTGCAAGAGG
137 L N I F Q L N L K K T Q N I Y E L Q E A
481
157 G V Q G V C R T H Y V I S E D S K A N H
541 AGGAGAGAATCACAAAAGATT
177 I T V T K S K D L S H C Q E R I T K D F
601 TCGGCTTGGCATACACTGAGAAGTGTGACGAATGCACTGAGCGGGTAAAGAGTCTGATTG
197 G L A Y T E K C D E C T E R V K S L I E
661 GGTGTATTGGTGTCTGAAG
217 T A S Y N Y I M K P T S A G V L V S E A
721 AGA
237 T V E E V Y Q F S P F N E I H G A A Q M
781 ATTTA
257 E V K Q S L A F V E I E K T P I A P F K
841 AAGCTGATTACTTGGCTCGTGGATCTCTGCGGTATGAGTTTGCAAGTGAGATTCTTCAGG
277 A D Y L A R G S L R Y E F A S E I L Q A
TGAAGC
297 P I Q L M K I S D A P A Q I T E I L K H
961 ACTTAAGTTTGTTCAGC
317 L V E N N V A M V H D D A P L K F V Q L
1021 ATCTGGAAGCAGTGCA
337 V Q L M R A A T F E D I E S I W K Q C K
1081 AG
357 D K P V