文档介绍：第三军医大学
硕士学位论文
GFP小鼠骨髓基质细胞诱导分化为神经细胞的实验研究
姓名:王宇飞
申请学位级别:硕士
专业:人体解剖与组织胚胎学
指导教师:应大君
20040501
第三军医大学硕士学位论文
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GFP green fluorescent protein 绿色荧光蛋白
BMSCs bone marrow stromal cells 骨髓基质细胞
FBS fetal bovine serum 胎牛血清
RA retinoic acid 维甲酸
bFGF basic fibroblast growth facter 碱性成纤维细胞生长因子
DMSO dimethyl sulfoxide 二***亚砜
BME â-mercaptoethanol â 巯基乙醇
BDNF brain-derived neurotrophic factor 脑源性神经营养因子
NGF nerve growth factor 神经营养因子
GFAP gliad fibrillary acidic protein 胶质纤维酸性蛋白
NSE neuron-specific enolase 神经元特异型烯醇化酶
NF-200 neurofilament protein 200 神经微丝蛋白 200
DAB diaminobezidin 二氨基联苯***
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The study on neural cell induced and differentiated
through/by bone marrow stroma cells in GFP mouse
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小鼠骨髓基质细胞诱导分化为神经细胞的实验研究
摘要
骨髓基质细胞是成体骨髓细胞中除造血干
细胞之外的另一类骨髓干细胞近年来的研究证明其具有多向分化的潜能包括向神
经干细胞转化并可进一步分化为神经元和神经胶质细胞体外诱导向神经细
胞分化最终的目的在于应用目前已有很多研究在体外培养扩增并诱导其向神
经细胞分化但关于分化后细胞表型稳定的研究还未见文献报道
目的研究骨髓基质细胞体外分离培养方法找出诱导向神经细胞分化的
优化方案观察诱导后细胞表型的稳定旨在为将来的应用做基础性研
究
方法选用绿色荧光小鼠作为研究对象分离培养骨髓基质细胞
并在体外进行细胞扩增和传代应用诱变剂维甲酸和巯基乙醇
碱性成纤维细胞生长因子二甲亚砜神经生长因子和脑
源性生长因子联合作用对小鼠进行诱导在其它诱导条件不变的
前提下对比含有不同浓度和的诱导剂对小鼠诱导后分化为神经
细胞比例的影响于诱导后对细胞表达神经微丝蛋白胶质原性纤维酸性蛋
白神经元烯醇化酶和纤维结合素的结果进行免疫荧光和
免疫组化的检测计算阳性细胞比例统计分析选出合适的诱导剂对比不同
诱导时间对小鼠分化为神经细胞比例的影响通过免疫荧光和组化的方法
进行检测并计算阳性细胞比例统计分析找出合适的诱导时间诱导后换液
去除诱导剂成分再加入脑匀浆上清液免疫荧光和组化检测其对细胞表型稳定性的
影响
结果小鼠分离后可在体外培养条件下生长增殖并传代培养
代后可形成形态均一的细胞连续传代代后仍可保持旺盛分裂能力说明骨髓基质
细胞具有良好的体外培养和体外扩增的能力
用含浓度的诱导剂进行诱导时随所浓度增高
和阳性细胞比例也呈现逐步增高趋势同时随浓度增高
阳性细胞比例则呈下降趋势用免疫荧光方法检测浓度为时
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分化为和阳性细胞比例为和显著高
于对照组用含浓度的诱导剂进行诱导时阳性细
胞比例随浓度增高变化不明显免疫荧光方法得到浓度达到时能够诱
导和阳性细胞比例为和与对照组差异显著
和联用时免疫荧光方法和阳性
细胞比例分别为和和联用时
和阳性细胞比例显著高于单用和联用时和阳
性细胞比例显著高于单用时所以和联用能够以较低的诱导剂浓
度得到较明显的诱导效果平行实验中免疫组化方法所得结果与免疫荧光