文档介绍：大鼠AKT蛋白(AKT)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围: 96T
5ng/L - 300ng/L
使用目的:
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中AKT蛋白(AKT)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠AKT蛋白(AKT)水平。用纯化的大鼠AKT蛋白(AKT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入AKT蛋白(AKT),再与HRP标记的AKT蛋白(AKT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的AKT蛋白(AKT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠AKT蛋白(AKT)浓度。
试剂盒组成
1
30倍浓缩洗涤液
20ml×1瓶
7
终止液
6ml×1瓶
2
酶标试剂
6ml×1瓶
8
标准品(480ng/L)
×1瓶
3
酶标包被板
12孔×8条
9
标准品稀释液
×1瓶
4
样品稀释液
6ml×1瓶
10
说明书
1份
5
显色剂A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2张
6
显色剂B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1个
标本要求
,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
240ng/L
5号标准品
150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
120ng/L
4号标准品
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
60ng/L
3号标准品
150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
30ng/L
2号标准品
150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
15ng/L
1号标准品
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,
轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
温育:操作同3。
洗涤:操作同5。
显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内