文档介绍：微生物学大实验
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(液体、固体、半固体三种)

(1)了解配制微生物培养基的原理和培养基的种类。
(2)掌握配制微生物通用培养基的一般方法和操作步骤。

培养异养细菌最常用的培养基是牛肉膏蛋白胨培养基,它是一种天然培养基。牛肉膏是牛肉浸液的浓缩物,含有丰富的营养物质,它不仅能为微生物提供碳源、氮源,还含有多种维生素。蛋白胨是酪蛋白、大豆蛋白或鱼粉等经蛋白酶水解后的中间产物,含有䏡、胨和氨基酸等丰富的含氮素营养物,因此完全能满足大多数异养细菌对营养的需要。

(1)试剂:牛肉膏、蛋白胨,NaCl,1mol/LNaOH,1mol/L HCl。
(2)器皿:台秤,玻璃烧杯,搪瓷烧杯,三角瓶,量筒,漏斗,试管,玻璃棒等。
(3)其他:pH试纸,牛角匙,牛皮纸,棉花,纱绳,灭菌锅等。

(1)配方及配量:,蛋白胨5g,,琼脂(固体6g 液体不加)蒸馏水500ml
(2)称取药品:按照营养基配方与配量分别称取各药品,取少于总量的水于烧杯中,将培养基成分(琼脂除外)逐一加入水中待溶。
(3)加热溶解:将烧杯放在石棉网上,用文火加热,并不断用玻璃棒搅拌,使各药品快速溶解,然后补水至500ml。
(4)调节pH:用1mol/l NaOH —,应缓慢加入,边加入边搅拌,并用pH试纸测酸碱度值。
(5)分装:将配制好的培养基分装到相应的玻璃器皿中,并在固体和半固体培养基中加入琼脂,贴好标签,待灭菌。

懂得加压蒸汽灭菌原理及其安全使用的注意事项。

以加热密封锅体内的水和水蒸气的压力来提高锅体内蒸汽温度而达到对物品灭菌的目的。

(1)加水:取出装料桶,往锅内加水至与搁架圈同样高度为止。
(2)装料:将待灭菌的物品放入装料桶内并放回锅。
(3)加盖
(4)排气:在水煮沸后,以蒸汽驱赶锅内的空气沿排气软管从排气阀中溢出,待空气排尽后,才可关闭气阀继续加热。
(5)升压、保压、降压
(6)取料

(1)注意检查锅体和锅盖上的部件是否完好,并严格按照操作程序进行,避免发生各类意外事故。
(2)灭菌时切勿擅自离开岗位,要注意压力表指针动态;要按培养基中的营养成分的耐热程度来设置合理的灭菌温度与时间,以免营养成分过多被破坏。
(3)务必待锅压下降到零后再打开排气阀和锅盖,否则因锅内压力突然下降,使瓶装培养基或其他液体因压力瞬时下降而发生复沸腾,从而造成瓶内液体沾湿棉塞或溢出等事故。
(4)在放入灭菌料桶前,切记应往锅体内加入适量的水,若锅体内无水或水量不够等均会造成在灭菌时引发重大事故。
2. 大肠杆菌的接种方法(穿刺接种法和液体接种法)

掌握穿刺接种法并观察细菌在半固体培养基中的运动力。

穿刺接种法就是用接种针挑取少量菌苔,直接刺入半固体直力柱培养基中央的一种接种法。

1、接种前准备
(1)标明菌名(2)旋松棉塞(3)点燃酒精灯
2、穿刺接种法(直握法)
(1)挑取菌种:在超净台中,酒精灯旁,左手持菌种管,右手拿接种针,经火焰灭菌后,用持针的右手拔出试管塞,试管口过火灭菌后再将接种针伸入菌种管中,现在斜面上端冷却后挑取少量菌苔,移出接种针,管口再过火,塞上塞子,将菌种管放回试管架上。
(2)刺穿接种:左手拿直立柱试管,在火焰旁用右手的小指和掌边拔出塞子。随之将试管口朝下,同时将接种针从直立柱培养基中央自下而上直刺到离管底1-(切勿穿透培养基),然后沿原穿刺线拔出接种针。管口过火,塞上塞子,插在试管架上。
(3)灭接种针上的残菌:将带有菌的接种针在火焰上烧红,经灭菌后才可以放在桌面上。随手再将塞子塞紧,以防脱落。
3、培养
将已接种的直立柱试管置37℃恒温箱中,培养24h后取出,通过透射光目测细菌在穿刺线上的生长情况,并记录结果。
4、接种后处理
(1)清洗:将废弃的菌种管塞子拔去,置水浴中煮沸20min,然后刷洗干净,倒置于试管架上,沥干。
(2)整理:清理桌面。

结果总体上来说算不错,穿刺线形状如玻璃棒,有扩散现象;边缘不整齐,这说明了大肠杆菌有鞭毛,可运动。

(1)半固体培养基琼脂的用量依据琼脂牌号不同而定的。