文档介绍：第六章目的基因导入受体细胞
第一节受体细胞
受体细胞:是指能够摄取外源DNA并使其稳定维持、具有应用价值和理论研究价值的细胞。
* 原核生物受体细胞
* 植物受体细胞
* 动物受体细胞
受体细胞选择的基本原则
便于重组DNA分子导入细胞内。
能使重组DNA分子稳定存在于细胞内。
便于重组体的筛选。
遗传稳定性高,易于扩大培养或发酵生长。
安全性高,无致病性,不会对环境造成污染。
内源蛋白水解酶活性低,便于表达蛋白积累。
遗传密码的使用没有明显的偏爱。
具有较好的转译后加工机制。
2. 原核生物受体细胞
1)原核生物受体细胞的特点
* 没有纤维素组成的细胞壁,便于外源
DAN进入细胞内
* 染色体裸露,便于外源DNA重组
* 基因组简单,便于进行遗传分析
* 单细胞生物,易于获得一致性受体细胞
* 培养条件简单,生长快,实验周期短
2)主要的原核受体细胞 * 大肠杆菌
* 枯草杆菌
* 蓝细菌
3)应用
* 构建基因组文库
* 表达基因产物
* 保存和扩增目的基因
3. 酵母受体细胞
1) 酵母受体细胞的特点
* 结构简单、遗传背景比较清楚。
* 具有真核生物蛋白翻译后加工和修饰系统。
* 不含特异性病毒和***,对人类安全。
* 培养条件简单,可进行大规模发酵。
* 能将表达产物分泌到细胞外。
2) 应用
* 构建基因组文库
* 表达外源基因
4. 植物受体细胞
1)植物细胞的特点
* 具有体细胞全能性,一个分离的活细胞
在合适的条件下可分化成植株
* 具有坚硬的细胞壁,可以纤维素酶处理
获得原生质体.
2)应用
转基因棉花,大豆,水稻,玉米,马铃薯,烟草等
表达外源基因
5. 动物受体细胞
1)动物受体细胞的特点
* 体细胞(昆虫、哺乳动物)
* 生殖细胞、胚胎细胞等具有全能性,可分
化、培养成转基因动物。
* 各种细胞株
2)应用
表达外源基因
转基因羊,鼠,兔,猪,牛等
第二节重组DNA导入受体细胞
(一)重组DNA导入原核受体细胞
作为原核受体细胞的基本条件
* 没有内源质粒:质粒的不相容性
* 核酸酶活性低:防止对外源DNA的降解
* 便于筛选:含有与质粒不同的抗性标记
(Transformation)
DNA分子通过与细胞膜结合进入受体细胞并在细胞内稳定维持和表达的过程.
1)菌体培养:
菌体活化
涂布平板
挑选单菌落
试管培养(液体培养,3-5 ml)
扩大培养(30-100 ml, OD550=)