文档介绍：第六章细胞融合
(Cell fusion)
概述
细胞融合(cell fusion)又称体细胞杂交(somatic
hybrydization)或细胞杂交(cell hybrydization ):
在离体条件下用人工方法将不同种或同种不同类型
的单细胞通过无形方式融合成一个杂合细胞,生产
特殊生物制品、分化再生新物种或新品种的技术。
细胞融合技术的出现标志着细胞工程的诞生。
目前被广泛地应用于单克隆抗体、生物的远缘杂
交、新品种的培育和人类基因图工作(小鼠和人类
细胞融合)。
概述
受精:雌雄生殖细胞间的自然融合。
体细胞间的融合现象:Muller(1838)发现脊椎
动物肿瘤细胞的多核现象。其后发现骨髓、肺组织
和各种正常组织及炎症和坏死部位的多核现象。
实验体细胞融合:在细胞培养技术之后。首先
(Lambert)发现体外培养的肿瘤细胞自发融合。
后(Okata,1962)发现仙台病毒可诱发艾氏腹水瘤
细胞融合,开创了动物细胞融合的崭新领域。其后
不同动物细胞、植物和微生物原生质体融合技术也
相继发展起来。
细胞融合的意义
细胞融合(cell fusion):将不同来源的原生质体(动
物细胞)相融合,使之分化再生、形成杂合细胞、新
物种或新品种的技术。
意义:可应用于优先选择改良、克服远缘杂交中的
不亲和障碍、更加广泛地组合起各种植物的优良遗传
性状,从而培养出理想的品种。可以避开生殖细胞的
受精过程,从而在亲缘关系更远的物种间实现基因转
移,创造出自然界中所没有的新物种或杂合细胞。还
可创造细胞质杂种。
细胞融合的原理和融合材料
1、细胞融合的基本原理:不同的原生质体或细胞→融合细
胞→新生物(或杂合细胞)。
两种不同植物的体细胞经纤维素酶、果胶酶消化,除去细胞
壁,得到原生质体(或动物细胞),通过化学或物理方法诱导
其细胞融合形成杂种细胞;以适当的技术进行杂种细胞的分拣
和培养,促使杂种细胞分裂形成细胞团、愈伤组织、直到分化
发育成杂种植株,实现基因在远缘物种间的转移。
2、融合材料
(1) 植物或微生物原生质体的制备
(2)  动物单个细胞的获得
获得步骤:
(1)  组织的获得、(2)  组织的消化、(3)原生质体或动
物单细胞的分离。
原生质体的制备与培养
原生质体的制备
:植物的叶片、根尖、花粉等。
2. 制备原生质体:机械法;酶解法
酶解法:(1)   取材消毒
(2)   酶解制备
(3)   原生质体收集
3.  原生质体的纯化方法
过滤-离心法;
漂浮法;
沉降法和漂浮法结合
原生质体的制备与培养
原生质体培养方法:
(1)液体培养法:将纯化后的原生质体悬浮于
液体培养基中培养。
(2) 固体平板法:固体培养基上培养。类似植
物单细胞培养法
(3)双层培养法:在琼脂培养基上部加入一薄
层液体原生质体培养液培养原生质体
动物单个细胞的获得
动物单细胞的获得:
1、组织的获得:处死动物取出组织块,放入小烧杯
中,组织块剪碎1mm3大小加入Hanks溶液,低速离
心,留下组织块。
2、组织的消化:胰蛋白酶消化:
①向组织块中加入30~50倍体积的胰蛋白酶液。
②37℃水浴内消化,每5~10分钟摇一次。
③Hanks漂洗两次。
④800r/min离心5min,弃上液,加入营养液。
细胞融合技术与融合细胞的选择
细胞融合技术主要有:
生物法——仙台病毒法
化学法——PEG结合高Ga2+、pH诱导法
物理法——电融合诱导法
融合细胞的选择:
融合细胞的类型:同核体;异核体;多核体。
常用的选择方法:遗传互补筛选法;抗性互补筛选
法;生长特性筛选法;物理特性筛选法;其他方法
生物法——仙台病毒法
灭活的仙台病毒(HVJ)可促使细胞凝结、使
细胞发生融合(HVJ与细胞膜的受体结合):
膜间相互渗透,胞质互相渗透。
,融为一体。
,分裂成含有两种染色
体的杂种子细胞。