文档介绍：选修I 专题5
课题1
DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定实验一、目的要求
1、了解从细胞中提取DNA的基本原理
2、初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法
3、观察提取出来的DNA
二、实验思路
1、DNA从哪提取?
2、怎样将DNA与细胞中的其他物质分离?
3、怎样鉴定我们提取的DNA?
1、提取生物大分子的基本思路
选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子
2、生物大分子
主要指蛋白质、酶和核酸
3、提取DNA的基本思路
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分
三、提取DNA的方法
4、DNA的溶解性
DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反
:①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图,思考在什么浓度下,DNA的溶解度最小? DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的?
mol/L时,DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低; mol/L时,DNA溶解度最小;当NaCl溶液浓度继续增加时,DNA的溶解度又逐渐增大。
②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出?
当***化钠的物质的量浓度为 2 mol/L时,DNA的溶解度最大,浓度为 mol/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理,可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。
6、DNA在酒精溶液中的溶解性
DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理,可以将DNA与蛋白质进一步分离
7、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
①蛋白酶能水解蛋白质,但是对DNA没有影响
②大多数蛋白质不能忍受60-80°C的高温,而DNA在80°C以上才会变性
③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜,去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响
8、DNA的鉴定
① DNA与二苯***(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯***可以作为鉴定DNA的试剂
②***绿(蓝绿色)
四、DNA的粗提取与鉴定的实验面临的问题
(一)实验材料的选取
不同生物的组织中DNA含量不同。在选取材料时,应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。你认为教材提供的材料中哪些不适合提取DNA?
哺乳动物的血液和液体培养基中的大肠杆菌。
从核DNA数目来看,猪38条,鸡78条,哺乳动物血0条,猕猴桃58条,洋葱16条,豌豆14条,菠菜12条,大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。
1、动物细胞
动物细胞的破碎较易,例如,在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤液即可
答:蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞胀裂,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂),从而释放出DNA
讨论:为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?
(二)破碎细胞,获取含DNA的滤液
2、植物细胞
①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜
讨论:加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?
答:洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于DNA的释放;食盐的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解
②实例:提取洋葱DNA时,在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐,进行从分的搅拌和研磨,过滤后收集研磨液