文档介绍：生物秀-专心做生物!
DNA的提取方法简介
为了研究DNA分子在生命代谢中的作用,常常
分子在生物体内的分布及含量不同,要选择适
当的材料提取DNA。
动植物中,小牛胸腺٠动物肝脏٠鱼类精子,植
物种子的胚中都含有丰富的DNA。
微生物中,谷氨酸菌体含生物秀 7%~10%,面包酵母
含4%,啤酒酵母含6%,大肠肝菌含9%~10%。
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从各种材料中提取DNA方法不同,分离提取的
难易程度也不同。
对于低等生物。如从病毒中提取DNA 比较容
易,多数病毒DNA 分子量较小,提取时易保
持其结构完整性。
从细菌及高等动植物中提取DNA难度大一些。
细菌DNA 分子量较大,一般达2×10 道尔顿。
因此易被机械张力剪断。细菌,除核
DNA 外,还有质粒DNA 等。
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1、核酸的理化性质
RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶,DNA则
为白色类似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有
鲜味外,核酸和核苷酸大都呈酸味。
DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物,一般都溶于
水,不溶于乙醇、***仿等有机溶剂,它们的钠盐比游离
酸易溶于水,RNA钠盐在水中溶解度可达/L。DNA
在水中为10g/L,呈黏性胶体溶液。在酸性溶液中,
DNA、RNA易水解,在中性或弱碱性溶液中较稳定。生物秀
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天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存
在于细胞核中。要从细胞中提取DNA 时,先把DNP
抽提出来,再把P除去,再除去细胞中的糖,RNA
及无机离子等,从中分离DNA 。
DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而
不同。DNP在低浓度盐溶液中,几乎不溶解,如在
mol/L的***化钠溶解度最低,仅为在水中溶解度
的1%,随着盐浓度的增加溶解度也增加,至1mol/L
***化钠中的溶解度很大,比纯水高2倍。
RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小,在
***化钠中溶解度较大。因此,在提取时,生物秀
常用此法分离这两种核蛋白。
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细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞。方
法有三种:
①机械方法:超声波处理法、研磨法、
匀浆法;
②化学试剂法:用理细胞;
③酶解法:加入溶菌酶或蜗牛酶,都可
生物秀使细胞壁破碎。
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由于高等动物DNA 主要存在于细胞核与线粒体
中,所以提取时有两个困难(高等植物与此类
似):
①破碎细胞难;从处死动物٠分离组织器宫到
破碎细胞费时长。在此时期间DNA 可能会被DN
ase降解,而动物组织:特别是肌肉组织很难破碎,
即使是较易破碎的肝٠肾等组织也往往使用组织
匀浆器,易造成DNA 断裂。
②分子量大,一般比细菌的大2—3个数量级,
比病毒的大4—5生物秀个数量。对不同生物材料,要根
据具体情况选择适当的分离提取方法。
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(1).浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常
用的方法是用1M ***纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少
量辛醇的***仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质
凝胶停留在水相及***仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍
体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以
1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按***仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些 .
以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于
蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的生物秀 DNase对
DNA 的降解作用,在***化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子
,,并称SSC溶液,提取
DNA.
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(2).阴离子去污剂法:
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使