文档介绍：1。变性:
二、聚丙烯酰***凝胶电泳
聚丙烯酰***凝胶电泳适宜分离鉴定低分子量蛋白质、小于1Kb的DN***,%(即500bp中的1bp)的核苷酸分子即能分离.
聚丙烯酰***凝胶是由丙烯酰***单体,在催化剂TEMED(N,N,N,N'一四***乙二***)和过硫酸铵的作用下,丙烯酰***聚合形成长链,聚丙烯酰***链在交联剂,N,N'一亚甲双丙烯酰***参与下,聚丙烯***链与链之间交叉联接而形成凝胶.
聚丙烯酰***凝胶孔径的大小是由丙烯酰***的浓度决定的,不同浓度丙烯酰***和DNA的有效分离范围见表2.
丙烯酰***(%)  有效分离范围(bp)  溴酚兰*  二甲苯青*
  100~2000  100  460
  80~500  65  260
  60~400  45  160
  40~200  30  70
  25~150  15  60
  10~100  12  45
*表中给出的数字为与指示剂迁移率相等的双链DNA分子所含碱基对数目(bp).
(一)材料
:电泳仪,垂直电泳槽及其附件.
:1。必要时可用KOH/甲醇清洗玻璃板和间隔片
,再充分漂洗,先用自来水,再用去离子水,应拿取玻璃板的边缘部分或戴手套操作,以免手上的油脂残留再玻璃板的工作面上。用乙醇冲洗玻璃板,并将其至于一边晾干。
:将较大的(不带拗口)玻璃板平放在试验台上,在玻璃板的两侧将间隔片平行至于边缘放妥:用凡士林轻涂以帮组与间隔片在后面操作中保持原位;将那板在间隔片上放稳。
%丙烯酰***
丙烯酰***,29克
N,N'一亚***双丙烯酰***,1克
H2O,加至100ml
装于棕色瓶内,4℃可保存二个月.
%过硫酸铵
过硫酰铵,1克
加水至,10ml
4℃可保存一周,-20℃可保存一个月.
:(89mmol/lTris-硼酸,2mmol/lEDTA(),TBE用5×储备液稀释即可,
(四***乙烯基二***)35ul
(二)聚丙烯酰***凝胶的制备与电泳
根据分离DN***段的大小及需凝胶的容积, 配制聚丙烯酰***凝胶.
,两块玻璃板的两侧及底部用1%的琼脂糖封边,防止封闭不严而使聚丙烯酰***液漏出.
~60℃角.
%浓度凝胶的毫升数.
,立即混匀,缓缓倒入两玻璃板间的胶床中,,室温静置30min左右至分离胶凝聚,倾去覆盖层,并用吸水纸吸净。
,密切注意防止梳齿下产生气泡,用一有力的夹将梳子夹在一边的玻璃板上,然后将玻璃板斜靠在物体上,使成10°角,可减少液体泄漏的机会.
(聚合完全后,用1×TBE浸润的纸巾保绕梳子和凝胶的顶部,然后用saran wrap膜密封整块凝胶,4度保存,直至使用),将玻璃板插入电泳槽中,上紧,倒入1XTBE