文档介绍：1---------
SYBR Green I可以替代很多实验室现在已经在用了
SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料,适用于各种电泳分析,操作简单:无须脱色或冲洗。至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍,用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强,背景信号低。可适用于多种电泳分析。
SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法:琼脂糖凝胶,聚丙烯酰***凝胶电泳,脉冲电场凝胶电泳,和毛细管电泳等。
SYBR Green I 与双链DNA的亲和力非常高,因此可以用做电泳前染色,对分子生物学中常用的酶(如:Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等)没有抑制作用。另外,SYBR Green I 与EB相比,诱变能力大大降低。
SYBR Green I 核酸染料特点
高灵敏:至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。
信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。
操作简单:无须脱色或冲洗。
适用范围广:可适用于多种电泳分析。
使用方便:不影响其它修饰酶作用。
经济:价格比银染便宜。
电泳用SYBR Green I 使用方法
SYBR Green I预染方法
1. 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳
2. 工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的SYBR GreenⅠ稀释100倍,即为SYBR GreenⅠ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。
3. 制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。
4. 样品染色:向分析样品中加入SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,使SYBR GreenⅠ与样品中DNA充分结合。SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10。
5. DNA Marker染色:将5μL DNA Marker和1μLSYBR GreenⅠ工作液混匀,室温放置5分钟,使SYBR GreenⅠ与DNA充分结合。
6. 上样、电泳:按常规操作。
SYBR Green I后染方法
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用PH - 的缓冲液(如:TAE,TBE 或 TE),按照10000:1的比例稀释SYBR GreenⅠ浓缩液,混匀,制成染色溶液。
3. 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰***凝胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上,让工作液均匀地覆盖整个胶板,并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
4. 用蓝盾TM观测。蓝光可透过玻璃,观测聚丙烯酰***凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入蓝盾TM内观测。
SYBR Green I使用注意事项
1. 在"SYBR GreenⅠ预染色方法"中,电泳时间不要超过2小时,否则SYBR GreenⅠ会从DNA上分离出来,会产生弥散状条带。
2. 在常规用酒精沉淀核酸的过程中,SYBR Green I 可以全部从双链核酸上去掉。
3. 如果想对用 SY