文档介绍：还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法
一、材料、主要仪器和试剂
1、材料小麦面粉;精密pH试纸。
2、主要仪器
(1)具塞玻璃刻度试管:20mL×11 (2)大离心管:50mL×2
(3)烧杯:100mL×1 (4)三角瓶:100mL×1
(5)容量瓶:100mL×3 (6)刻度吸管:1mL×1;2mL×2;10mL×1
(7)恒温水浴锅(8)沸水浴
(9)离心机(10)分光光度计
3、试剂
(1)1mg/mL葡萄糖标准液
准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg,置于小烧杯中,加少量蒸馏水溶解后,转移到100mL容量瓶中,用蒸馏水定容至100mL,混匀,4℃冰箱中保存备用。
(2)3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂
,加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中,再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠,搅拌溶解,冷却后加蒸馏水定容至1000mL,贮于棕色瓶中备用。
(3)碘-碘化钾溶液:称取5g碘和10g碘化钾,溶于100mL蒸馏水中。
(4)酚酞指示剂:,溶于250mL70%乙醇中。
(5)6MHCl和6MNaOH各100mL。
二、操作步骤
取7支20mL具塞刻度试管编号,按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂,配成不同葡萄糖含量的反应液。
表1葡萄糖标准曲线制作
管号
1mg/mL 葡萄糖标准液
(mL)
蒸馏水
(mL)
DNS
(mL)
葡萄糖含量
(mg)
光密度值
(OD540nm)
0
0
2
0
1
2
3
4
5
6
将各管摇匀,在沸水浴中准确加热5min,取出,冷却至室温,用蒸馏水定容至20mL,加塞后颠倒混匀,在分光光度计上进行比色。调波长540nm,用0号管调零点,测出1~6号管的光密度值。以光密度值为纵坐标,葡萄糖含量(mg)为横坐标,在坐标纸上绘出标准曲线。
(1)还原糖的提取
,放入100mL烧杯中,先用少量蒸馏水调成糊状,然后加入50mL蒸馏水,搅匀,置于50℃恒温水浴中保温20min,使还原糖浸出。将浸出液(含沉淀)转移到50mL离心管中,于4000r/min下离心5min,沉淀可用20mL蒸馏水洗一次,再离心,将二次离心的上清液收集在100mL容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,混匀,作为还原糖待测液。
(2)总糖的