文档介绍：绝对定量方法(LC)
刘富发
20151027
常用方法
外标法
内标法
简便、快速
系统误差大(检测器的响应性能、柱温、流动相流速及组成、进样量、柱效等,样品前处理)
克服色谱条件差异,进样量不准
合适的内标物
外标法
配一系列浓度标样(6~8)
母液
6
稀释
5
稀释
4
稀释
3
稀释
2
稀释
1
稀释
内标法
标样母液
+
内标标样
6
5
4
3
2
1
标样溶质浓度依次升高
内标标样浓度一致
内标物的要求
✎化学结构与待测组分相似(同系物、异构体)
✎在样品中不存在
✎不与样品中组份发生任何化学反应
✎保留值与待测组分接近
✎浓度(响应值)与待测组分相当
✎其色谱峰与其它色谱峰分离好
方法认证
选择性
精密度
准确度
线性范围
检测限
定量限
耐用性
稳定性
选择性
色谱分离条件(固定相,流动相,疏水性,检测器)
分离度
峰高、峰面积
痕量分析
t—保留时间;w—半高峰宽
精密度
重现性(日内,日间),保留时间、峰面积
>5次重复,三种不同含量水平(不同含量的精密度要求不同)
LLOQ CV<20%;其他 CV<15%
✔峰积分不一致
✔进样或进样器有问题
✔样品分解或制样时引入了杂质
✔色谱问题
✔检测器响应变化
精密度的影响因素
准确度
对比成熟方法
对比已知含量的标准物
一定量参比物加入到空白基质(回收率)
测量值与真实值的误差
✔峰面积积分不正确
✔样品分解或制样时导入杂质
✔样品瓶不密封,样品或溶剂挥发
✔制样不正确
✔进样问题
✔内标制备不正确
相关系数