文档介绍：第三军医大学
硕士学位论文
NF-κB在迷路炎发病中的作用以及PDTC的影响研究
姓名:王朝永
申请学位级别:硕士
专业:耳鼻咽喉科学
指导教师:姬长友
20040501
第三军医大学硕士学位论文
NF-κB 在迷路炎发病中的作用以及 PDTC 的影响研究

摘要

背景及目的:既往认为内耳缺乏免疫细胞,是一免疫豁免器官,不受全身免疫反
应的影响,而近来的研究发现, 内淋巴囊及其周围含有浆细胞和免疫活性细胞,内耳
处于免疫系统的监视之下,对内外源性刺激能发生快速反应而引起迷路炎或免疫应答。
核转录因子-κB(nuclear transcription factor κB, NF-κB)是一类重要的转录激活因子,
在调节炎症反应中起着关键作用,它的过度活化可引起机体的炎性损害。因此我们推
测迷路炎的发生可能与局部 NF-κB 的过度活化有关。本研究旨在通过检测迷路炎时
NF-κB 的 p65 亚基及其下游因子 TNF-α、IL-2 mRNA 的变化,探讨 NF-κB 与迷路炎
的关系,期望为炎性损害引起的内耳功能障碍的防治提供一定的理论依据。
方法:1、建立迷路炎动物模型:48 只健康豚鼠,随机分为 LPS(haride)
、、1mg/ml 实验组和对照组,LPS 各实验组分别用、、1mg/ml 的 LPS
注入中耳腔,对照组注入等量生理盐水。在注药后 6h、48h、2w 三个时间点,每组各
取 4 只,做听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测和光镜、电镜形态
观察耳蜗病理变化,选择建立模型的合适浓度。2、NF-κB p65 和 TNF-α、IL-2 mRNA
的检测:健康豚鼠 42 只,随机分为三组:①LPS 实验组,1mg/ml 的 LPS 注入中耳腔;
②二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)治疗组,鼓膜注射 1mg/ml
LPS 前,以 100mg/kg 体重经腹腔注射 PDTC;③对照组,双耳注入生理盐水。以 6h、
48h、2w 为观察点,ABR 检测后处死动物,分别用免疫组织化学(immunohistochemistry,
IHC)和原位杂交(in-situ hybridization histochemistry,ISHH)技术检测耳蜗 NF-κB p65
和 TNF-α、IL-2 mRNA 的表达。
结果:
1、不同浓度 LPS 对耳蜗形态和功能的影响:整个观察期内,、 LPS
不能诱发迷路炎和听阈改变;1mg/ml LPS 在 6h、48h 可引起听阈显著升高和迷路炎,
2w 时基本恢复正常。
2、NF-κB p65 的表达:NF-κB p65 主要表达于正常豚鼠螺旋韧带 I 型纤维细胞的
胞浆。LPS(1mg/ml)刺激后 6h,耳蜗多个部位如螺旋韧带(spiral ligament,SL)Ⅰ
~Ⅴ型纤维细胞、根细胞和螺旋神经节细胞(spiral ganglion cell,SGC)等表达增强,
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以胞核染色为主;48h 的表达强于 6h (P﹤),而 2w 与对照组无显著性差异(P>
)。
3、TNF-α mRNA 的表达:正常耳蜗无 TNF-α mRNA 的表达。LPS 刺激后 6h,耳
蜗 SGC、螺旋缘呈阳性染色,血管纹(stria vascularis,StV)、蜗螺旋轴静脉(spiral
modiolar vein,SMV)和 SL 呈弱阳性,以胞核染色为主;48h 表达增强,2w 后仅 SGC
呈弱阳性染色。
4、IL-2 mRNA 的表达:正常耳蜗无 IL-2 mRNA 的表达,仅在 LPS 实验组和 PDTC
治疗组 6h 时间点,螺旋缘和 SGC 有表达,而其余各组均未见表达。
5、PDTC 对模型动物的影响:PDTC 治疗组豚鼠 6h、48h 的听力损失和耳蜗炎症
程度以及 NF-κB p65 和 TNF-α mRNA 的表达明显轻于相应的 LPS 实验组,而随着病
程的延长,2w 时这种差距已不明显(P>)。
结论
1、中耳腔内不同浓度的 LPS 对豚鼠内耳及听阈的影响不一,1mg/ml LPS 可诱发
迷路炎和听力损害。
2、LPS 诱发的急性迷路炎可能与耳蜗局部 NF-κB p65 的活化有关,其机制可能
是 LPS 的刺激引起 NF-κB 过度活化、进而诱导以 TNF-α为代表的多种细胞因子和炎
症介质的大量转录,最终