文档介绍：复旦大学
硕士学位论文
PGD210转染DC肿瘤疫苗的初步研究
姓名:常春康
申请学位级别:硕士
专业:内科学
指导教师:王椿
20040501
比较转染的与未经转染的,刺激赴辗⒚庖哂Υ穑行Ъし细胞并杀伤细胞的功能。编码肿瘤特异性抗原幕騊既隓①用教授馈赠的质粒转入由少量提取的质粒分别进行酶切鉴定和ǖ姆椒ㄖな滴狿柿#缓②用电转染的方法将大量抽提的质粒转入丈ㄖ瞥傻腄S③用带有质粒的与未经转染的,分别刺激赴儆昧魇较赴染色法比较杀伤细胞的功能。④酶切鉴定和ǖ姆椒ňな滴狿柿!瞧ü庵柿W魑M忍跫缱H镜亩哉蘸蚏ňな礟柿M③转染的刺激赴簂,:鄙薑赴陌俜直确直鹗H镜腄碳细胞诱发免疫应答,有效激发赴⑸鄙薎细胞的功关键词:,,电转染,杀伤功能中文摘要:方法,为将来制成转染疫苗用来治疗慢性髓细胞白血病作一个前期的初步研究。方法:摇菌后制备成的感受态细胞,经对其进行大量抽提。荧光质粒作为同等条件电转染的对照,并用鉴定质粒转入后转录的产物,证实电转染成功。过电转染转入。%,.ィ%淳H镜腄碳细胞:,:%,.,检咧当冉嫌型臣蒲Р钜臁能强于未经转染的。目的:结果:结论:
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前言,悄壳凹褐5墓δ茏钋康目乖岢氏赴疫应答。它在免疫激活、免疫耐受、肿瘤免疫、移植免疫以及抗感染免疫中都扮演着疫荷瘤宿主,可有效激发体内赴让庖呦赴鄙酥琢觯V琢霾∪说闹瘟萍翱蹈因,故而无法引起机体有效的抗肿瘤免疫应答。因此,加强肿瘤抗原的提呈作用,有利于机体免疫识别和排斥肿瘤。当前疫苗的抗肿瘤临床应用试验取得了令人鼓舞的结果,在抗肿瘤免疫治疗中的应用已成为肿瘤主动特异性免疫治疗的一个研究瓺纳镅匦约捌涔δ众所周知,起源于骨髓疤逑赴缶Q方敕橇馨妥橹分化为不成熟的不成熟的低水平表达共刺激分子和粘附分子,体外激发混合淋巴细胞反应较弱,具有很强的摄取和加工抗原的能力,但其提呈抗原的能力很弱。在抗原如、一茸饔孟轮鸾コ墒欤硐治?乖纳闳『图庸つ芰跞酰琈—和共刺激分子表达上调,并迁移进入局部淋巴结。现已证实。’成熟过程中迁移能力的变化与趋化因子受体表达改变有关,摄取抗原后,通过自分泌机制上调表达猯一和等趋化因子引起同族和受体下调,并上调表达,获得与其配体虴的反应性,虴主要由次级淋巴器官内皮细胞和细胞区的间质细胞分泌产生,从而使进入局部淋巴结的卣餍愿弑泶镉肟乖岢视泄氐獻和狪喾肿樱⒏咚奖泶锒嘀止泊碳し肿覤/、—/一疌等‘ǖ婪⑾忠桓鲂碌腂易宄稍盉的内吞三种方式摄取抗原,在胞内将抗原降解,加工为短肽,转运至、类的是细胞外抗原。现己证实,可通过类分子途径提呈外源性抗原,启动年和首先报道了鼠脾细胞内具有树突状细胞,其最大的特点是能有效地刺激初始型赴琓诱发初次免重要角色。应用肿瘤细胞的特异性抗原,以各种手段修饰制成肿瘤疫苗,以此免带来了新的希望。免疫治疗作为恶性肿瘤综合治疗的重要组成部分,近来受到广泛关注。由于多数肿瘤抗原的免疫原性较弱,肿颖泶锵碌鳎狈泊碳ひ蜃拥仍ň佑谏掀ぷ橹俺砸酝獾氖抵试嗥鞯募渲省赴辗⒚庖哂Υ稹3墒霥达高度局限于,不与和一岷希鍪怯隑籋疨狶氖芴錚~岷希浯碳细胞增殖的能力比一俊ü桃⑼淌珊褪芴褰榈分子富含区,形成肽一肿痈春衔铮⑻岢视赥细胞表面供其识别,启动免疫应答。传统认为,猯类分子提呈来自于细胞内抗原,而喾肿犹岢热点。痗及粘附分子一疌/、,
类限制性的从蚆类限制性的细胞反应。等“’用狪蛉毕菪∈笤贒免疫后不能产生Υ鸬氖笛榻徊街な担瓺奶逋庥盏近年来,对启动和调节免疫应答的深入认识为抗肿瘤疫苗的设计提供了和一阻止的成熟,导致机体的免疫耐受。体外激活后在回输可避或肿瘤特异性抗原发机体特异的抗肿瘤免疫应答。疤逑赴贕和猘的共同作用下,每外周血或每撬一淖饔孟拢庵苎?捎盏疾个,此法筒单而有效,如供体先用法诱导的功能是有缺陷的,其迁移能力、促细胞激活和赴只墓δ受损,这与抑制磷脂酶活性导致虹小板活化因子和类花生酸类物质合成受抑有关。如用騃〈鶬诱导则可以克服这些缺陷,因为幌瓺琢鲆呙绲奶逋庵票肿瘤疫苗的体外制备有多种方法:”肿瘤抗原肽或蛋白体外致敏。肿瘤细胞总抗原致敏。逋庥盏悸粤O赴匝病中的肿瘤细胞形成。琢鱿赴丛碦致敏。嗦胫琢鎏匾煨钥乖的基因导入的方法。由于基因转染的肿瘤疫苗能提供更多有效的可供识别的抗榈蓟蜃R频脑靥琀约澳壳罢谛似鸬穆《驹靥,如:人类免疫缺陷病毒载体取U庑┎《驹靥逅涓饔星铮币捕几髯源嬖谧拍岩钥朔娜毕荨能感染非分裂细胞。介导的基因转移不发生整合,难以获得转基因的长期、稳定表在激活呙缬盏嫉腃应答中需要狪嘞拗菩缘腃赴母ㄖ理论基础,而体外诱导方法的建立为临床应用铺平了道路。肿瘤细胞可通过分泌开肿瘤抑制的成熟,传递特定的肿瘤相关抗原琓庖呦低常欣诖蚱颇褪埽目前体外诱导的主要有两种方法”’:一