文档介绍：第三军医大学
硕士学位论文
Survivin在胶质瘤中的表达及其反义核酸对胶质瘤细胞增殖、
分化和凋亡的影响
姓名:王志成
申请学位级别:硕士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:郭德玉
20040501
第三军医大学硕士学位论文
Survivin 在胶质瘤中的表达及其反义核酸
对胶质瘤细胞增殖分化和凋亡的影响

摘要

目的: 探讨胶质瘤中 survivin 蛋白的表达及其临床意义以及survivin 反义核酸对胶
质瘤细胞 survivin 表达细胞增殖分化和凋亡的影响为进一步深入研究 survivin
在胶质瘤发生发展中的作用提供资料
方法: 1. 收集胶质瘤石蜡标本 91 例其中级 26 例级 54 例- 级 11
例用免疫组化染色检测瘤组织中 survivin 和 PCNA 蛋白的表达情况; 用 TUNEL 技术
检测细胞凋亡的变化 2. 应用分子生物学技术构建 survivin 反义核酸真核表达载体
pIRES2-EGFP–SVVas 并用脂质体介导转染胶质瘤细胞株 SHG-44 细胞经 G418 筛
选阳性转染细胞克隆检测其转染前后的细胞生长曲线细胞周期以及细胞凋亡的改
变通过 RT-PCR 免疫组化及 western blot 检测细胞中 survivin mRNA 和蛋白的表达
及 PCNA GFAP 蛋白的表达
结果 1. 胶质瘤细胞中有 survivin 蛋白的表达且随着肿瘤级别的增高瘤细胞
survivin 蛋白的表达增强~ 级胶质瘤细胞中 survivin 蛋白阳性表达的百分率分别为
级 % 级 % ~ 级 % 2. 胶质瘤细胞中 survivin 蛋白的表达与凋亡
指数呈负相关与 PCNA 的标记指数呈正相关 3. 成功构建 survivin 反义核酸真核表
达载体 pIRES2-EGFP-SVVas 并用脂质体导入胶质瘤细胞株 SHG-44 细胞中且有效表
达使 SHG-44 细胞中 survivin mRNA 和蛋白表达水平均降低 4. Survivin 反义核酸转
染 SHG-44 细胞经 G418 筛选获得阳性克隆与转染空质粒的 SHG-44 细胞和未转染
的 SHG-44 细胞相比上述稳定转染细胞的生长速度减慢出现 G0/G1 期细胞增多 G2/M
和 S 期细胞减少 PCNA 标记指数降低细胞凋亡指数增高和 GFAP 表达增强
结论 1. 胶质瘤细胞中不仅有 survivin 蛋白的表达且其表达程度与肿瘤的恶性
程度有关 survivin 反义核酸真核表达载体 3. 反义 survivin 可明显降低
胶质瘤细胞 survivin 基因在转录和翻译水平的表达 4. 反义 survivin 抑制胶质瘤细胞
株 SHG-44 细胞的增殖促进其分化和凋亡
关键词 survivin 胶质瘤测序真核表达转染细胞凋亡细胞增殖逆转录
聚合酶链反应
5
第三军医大学硕士学位论文
Expression of survivin and the affection of its antisense
gene on cell proliferation, differentiation and apoptosis in glioma

Abstract

Objective: To investigate the protein expression of survivin and the affection of its
antisense gene on cell proliferation ,differentiation and apoptosis in glioma so as to provide
basic data for further study on the roles of surviving in the development of glioma.
Methods 1. The immunohistochemistry was used to measure protein expression of
survivin and PCNA, and TUNEL was used to detect cell apoptosis in 91 cases of glioma
with grade 26 cases, grade 54 cases, grade - 11 cases. 2. Molecular cloning
technique was used to cons