文档介绍：实验课题:观察DNA和RNA在细胞中的分布
一、实验原理
,***绿和吡罗红均为碱性染料;
DNA﹢***绿→绿色,RNA ﹢吡罗红→红色。
***绿与吡罗红作为混合染料使用可显示细胞中DNA和RNA在细胞中的分布。
,加速染色剂进入细胞,同时使染色体中的DNA与蛋白质分离,有利于DNA与染色剂结合。
补:高温﹑酸﹑碱等条件能改变细胞膜的通透性,加速染色剂进入细胞。
我们观察到细胞核中的DNA被染成绿色
而细胞质中的RNA被染成红色。
操作步骤
注意问题
解释
取口腔上皮细胞制片
载玻片要洁净,%的NaCl溶液
用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻刮几下取细胞
将载玻片在酒精灯下烘干
防止污迹干扰观察效果
保持细胞原有形态
消毒为防止感染,漱口避免取材失败
固定装片
水解
将烘干的载玻片放入质量分数为8%的盐酸溶液中,用300C水浴保温5min
改变细胞膜的通透性,加速染色剂进入细胞,促进染色体的DNA与蛋白质分离而被染色
冲冼涂片
用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片
洗去残留在外的盐酸
染色
滴2滴吡罗红甲绿染色剂于载玻片上染色5min
观察
先低倍镜观察,选择染色均匀、色泽浅的区域,移至视野中央,调节清晰后才换用高倍物镜观察
使观察效果最佳
步骤总结
斐林试剂
苏丹Ⅲ
橘黄色
红色
砖红色沉淀
紫色
苏丹Ⅳ
双缩脲试剂
鉴定物质
试剂
实验现象
还原性糖
脂肪
蛋白质
淀粉
碘
蓝色
生物组织中还原性糖、脂肪、蛋白质和DNA的鉴定
1、实验原理:
还原性糖+斐林试剂→砖红色沉淀
还原性糖:葡萄糖、麦芽糖、果糖
非还原性糖:蔗糖、淀粉等
+
→
2、配制斐林试剂:
实验一:还原性糖的鉴定
水浴加热
实验一:脂肪的鉴定
1、实验原理:
脂肪+苏丹Ⅲ→橘黄色
脂肪+苏丹Ⅳ→红色
取少量脂肪样液,加入苏丹Ⅲ,震荡,可看到溶液呈了橘黄色,本实验我们用苏丹Ⅲ做染液。
实验一:蛋白质的鉴定
1、实验原理:
蛋白质+双缩脲试剂→紫色络合物
2、材料用具:
豆浆、蛋清、牛奶都是很好的实验材料。
本实验我们用蛋清做实验材料,在用蛋清做实验材料时,要注意将蛋清稀释,如果稀释不够,反应后的产物会粘固在试管内壁上,使反应不容易彻底。
问题探讨:
1、在做还原糖、蛋白质鉴定的实验时,为什么要留出一部分样液?
作对照
2、使用双缩脲试剂时为什么B液只能加3~4滴而不能
过量?
过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应,使溶液呈蓝色,而掩盖生成的紫色。
3、为什么斐林试剂要现配现用,不能放置太久?
时间太长,Cu(OH)2悬浊液就沉淀在试管底部而无法参与反应。
深化
比较项目
斐林试剂
双缩脲试剂
不
同
点
使用方法
甲液和乙液混合均匀后方可使用,且现配现用
使用时先加A液再加B液
呈色反
应条件
需水浴加热
不需加热即可反应
反应原理
还原糖中的醛基被Cu(OH)2氧化,Cu(OH)2被还原为Cu2O
具有两个以上肽键的化合物在碱性条件下与Cu2+反应生成络合物
颜色
砖红色
紫色
浓度
g/mL
B液CuSO4溶液浓度为