文档介绍：法医DNA提取方法
一、血液DNA的提取
Chelex-100法
酚/***仿/异戊醇法
盐析法
磁珠法
硅珠法
FTA技术
Chelex-100法:
原理:
Chelex是一种以亚氨二乙酸为吸附因子的苯乙烯与二乙基苯的共聚物,对多价金属离子有螯合作用,可防止DNA在煮沸加热前被降解,同时在高温低离子强度下还有催化DNA释放的作用。这样既可减少DNA的损失,又可削除扩增中的一些抑制因素。
Chelex-100法:
优点:快速、方便,且仅在一个管内进行, 减少污染
缺点:DNA提取的浓度小,对检材条件要求较高,对被泥土、石灰粉、染料污染的检材效果不佳,常导致扩增效率下降或失败。
Chelex-100法:
所取全血与DNA含量之间的关系:
全血(ul) 理论DNA 产量(ug)
1 ~
10 ~
100 2~4
200 4~6
400 8~10
Chelex-100法:
注意事项:
,DNA纯度比有机溶剂提取法低;
-100法将DNA双螺旋打开,不能用像EB染料插入方法进行定量,只能用杂交方法定量;
***段受到损害而断裂,对于大于500bp的片段扩增成功率低。
-100在配置数小时后螯合能力就有下降趋势,将会导致提取的DNA溶液中有各种金属离子或抑制剂,对PCR反应可能有影响。
酚/***仿/异戊醇法
原理:
通过酚-***仿混合物萃取 DNA溶液中的蛋白质类有机物质,而保留 DNA 于水相溶液中。
优点:
适用所有生物检材,提取 DNA 分子结构完整,特别适合 RFLP、测序等需要大分子 DNA分析技术。
酚/***仿/异戊醇法
缺点:操作步骤复杂,需要多次更换离心管,容易交叉污染;
注意事项:
a. 操作中注意避免交叉污染;
b. DNA得率较低,不适合微量DNA检材;
c. 操作的误差所可能残留的成分可能抑制PCR反应,各种成分对PCR的抑制作用如下:
几种盐类对PCR的抑制浓度:
盐析法:
原理:利用6M的NaCl或醋酸钠沉淀蛋白质代替有机酚-***仿抽提步骤去除蛋白质,其他过程同有机溶剂提取法。
优点:操作简单,步骤少,不使用有毒害的化学试剂酚和***仿
缺点:得到的DNA盐浓度较高,对下游的PCR反应影响较大