文档介绍：复旦大学
硕士学位论文
超速冻存小鼠卵巢组织的可行性研究
姓名:张佳荣
申请学位级别:硕士
专业:妇产科学
指导教师:万小平
20040417
超速冻存小鼠卵巢组织的可行性研究中文摘要R猐目的探讨超速冷冻和慢速冷冻技术对小鼠卵巢组织冷冻损伤程度的影响。方法使用旺染色和际醴直鸲科拦蓝炒婧蟮氖蓟雅菁俺跫卵泡的形态学及系谋浠S妹庖咦榛椒ḿ觳舛炒娓此蘸蟮男∈舐殉沧织中窦前卵泡中及的表达。结果超速冷冻组组惺蓟雅菁初级卵泡数为.±.,慢速冷冻组组孪识哉组组S胄孪识哉兆楸冉希炒孀橹新雅菔灾陆.,±、±和±。与新鲜对照组比较,冻存组中正常形态的卵泡数显著下降.,:新鲜对照组中为.%倮涠匙槲.%倮涠匙槲.%/、.%/、.%/。表达阳性率分别为.%//。=崧鄢倮涠澈吐倮冻对小鼠卵巢组织损伤程度的影响无明显差异。超速冷冻可能是一种简便可行、较理想的冷冻技术。丶蔧冻存:卵泡;小鼠卵巢;凋亡;缝隙连接;;超运盗在盒撬苣鼙ヵ叫载饺
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前言卵巢移植的最初尝试可追溯至世纪,但自身卵巢移植因缺少组织长期冻存技术,当时实际也无可行性。芳甏谝桓隼涠潮;ぜ烈桓视捅环现,冷冻卵巢移植工作随之出现了新的转机。和在年进行,卵巢组织冷冻的早期动物研究,在实验中,卵巢组织切除,冷冻融解后又被移植回卵巢位置,受者不久妊娠成功。但此后余年,该技术未有明显进展。直至年代,该技术在生物学和生殖医学中的巨大应用前景,又重新唤起了人们对卵巢冷冻和移植探索工作的兴趣。卵巢组织对诸如烷化剂和离子化射线的细胞毒治疗十分敏感。由于卵巢有内分泌和生殖两项功能,其损伤会导致包括闭经、月经不规则、性欲丧失、第二性征缺乏、不育症和卵巢早衰等在内的一系列临床问题。据报道经联合抗癌治疗的癌症患者,%在岁发生绝经,而未经治疗对照组的这一比例仅为ァK孀医疗技术的进步,癌症患者的生存率也日益提高,因大剂量化疗或全身放疗丧失卵巢功能的年轻妇女和儿童也在增多。卵巢组织的冷冻和再植入将为这些妇女和儿童保留卵巢功能带来福音。此外,其他因遗传、炎症和自身免疫等因素导致卵巢功能早衰的病人,也可以从卵巢冷冻和移植技术的发展中获益。对面临丧失卵巢功能的病人来说,保存生育能力有如下几种选择:卵细胞冷冻、胚胎冷冻和卵巢皮质组织冷冻。正如前述,目前人卵细胞冻融技术总体讲尚未成熟,成功率仍十分有限,胚胎冷冻虽已较为成熟,但需促排卵,需时较长,不利于及时进行临床治疗,而且促排卵治疗的应用有促进部分癌症进一步发展的可能。另外儿童或未婚女子也很难接受捐精者的精子进行R虼耍咛ダ涠在癌症患者中的应用也十分有限。卵巢组织冷冻不会耽误抗癌治疗,复苏后进行自体移植也不存在伦理问题,故具明显的优越性。卵巢组织冻存实际需要冻存的是卵巢皮质中的未成熟原始卵泡,由于原始卵泡处于相对的代谢不活跃状态,缺乏透明带和皮质颗粒,没有纺锤体,体积相对较小,冷冻保护剂更容易穿透,因此,原始卵泡比其他各成长时期的卵泡更能耐受周围温度的剧烈变化。由于原始卵泡冻融后,还需经过较长的成熟过程,因此更有机会修复细胞器和其他结构的因冻融引起的非致命损伤。,并取得较高的卵泡存活率,但是此方法需要昂贵的仪器且耗时。超速冷冻AЩ涠一快速复苏足另一种可供选择的冷冻技术。高浓度的冷冻保护剂在冷冻过程中不
形成冰晶等固体,而成为“超冷”的高度粘稠的液体。与单纯的冷冻相比,玻璃化法的明显的优点是可以避免冰晶的形成及其带来的损伤,不需要慢速冷冻的程序降温仪设备,冷冻所需的时问也大大下降。但由于玻璃化法需使用高浓度冷冻保护剂,存在着因保护剂毒性而损伤卵泡。.各级卵泡是由卵母细胞和颗粒细胞构成的。因此,本研究将完整的小鼠卵巢组织进行慢速冷冻和超速冷冻并快速复温,用染色和际醴直鸲评估冻融后卵巢组织中的始基卵泡形态学改变及凋亡情况,透射电镜观察超微结构的变化。用免疫组化方法检测冻存复苏后的小鼠卵巢组织中窦前卵泡中及的表达。探讨超速冷冻小鼠卵巢组织的可行性。超逮莲在尘基髓墓堑熟殴亘复世蟹嚣一
,卵巢组织库的建立将为那些可能发生卵巢功能早衰的妇女提供了保存生育力的可能““