文档介绍：复旦大学
硕士学位论文
成人眼IPE与RPE细胞体外培养及其PEDF、VEGF表达研究
姓名:严翔
申请学位级别:硕士
专业:眼科学
指导教师:张勇进
20040420
成人眼虹膜色素上皮与视网膜色素上皮细胞体外培养及其、表达研究摘要方法:以酶辅助显微分离一酶消化法分离赴⑴嘌悦赶ǚ掷曲线,以鼠抗人角蛋白抗体对培养的隦细胞进行免疫学鉴定,透射电镜观察细胞超微结构。均呈多角形或梭性,传代细胞伸展更加明显。两种细胞生长曲线接近。透射成人跟隦细胞,两者在体外培养条件下形态、结构以及生长情况相结论:蚏细胞均1泶颬隫细胞在关键词:扇搜跧与赴逋夥掷搿⑴嘌爰目的:体外分离培养成人眼隦细胞,观察其形态、结构及生长情况。赴⑴嘌怪孟嗖钕晕⒕倒鄄煸氪ù赴で榭觯杓巧结果:体外成功培养出隦细胞,两者角蛋白抗体染色均为阳性。原代细胞均含色素颗粒,随传代次数增加色素逐渐减少甚至消失。细胞伸展后电镜显示均具有正常细胞器结构。结论:利用酶辅助显微分离~酶消化法与酶消化法分别获得了大量高纯度的似,为进步研究两者功能提供了实验基础。甈诔扇搜跧与赴泶锊舛目的:测定并比较与在成人眼隦细胞中表达情况。方法:利用一步法提取生长近融合传二代隦细胞总表达进行逆转录聚合酶链反应检测,同刚以酶联免疫吸附实验舛街峙嘌赴锨逡褐蠵俊结果:体外培养的成人眼隦细胞均表达和含量均低于赴琁细胞上清液中含量也明显低于赴非逡骸2钜煊型臣蒲б庖。虹膜色素上皮;视网膜色素上皮;人;细胞培养:色素匕皮衍生因子;血管对其、细胞的和表达及蛋白分泌水平陀赗细胞,其表达水平也比细胞低,提示两种细胞表达细胞因子功能上存在差异。内皮譬二陡网子,、正摘要
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刖赴浦渤晌V瘟芌功能异常所致视网膜变性疾病的新方法。虽然视网膜下腔通常被认为是一“免疫赦免区”,但这个免疫赦免在视网膜下的完整性,从而引起机体针对赴浦参锏拿庖吲懦狻W蕴錜赴浦来源于神经外胚层,解剖上具有连续性,形态相似。推测两者可能具有相似的功墓δ堍,可以形成紧密连接结构对大分子物质具有屏障作用薄浚‘毫湎喙匦曰瓢弑湫茄现厮鸷θ巳菏恿Φ囊焕嗉膊。殉晌N方国家老年人群中致盲的首要原冈『】啊D壳叭衔#珹⒉』碇校油此外还有‘蝤疾病如酆现瓢哂Q涣嫉取加隦功能异常或细胞变性有关。此类疾病尚缺乏有效的治疗方法。有不少学者提出以赴浦怖刺娲垂δ芤斐5腞细胞,治疗此类由赴δ芤斐K碌母辏珿產取首次将体外培养的细胞悬液移植于猴眼的视网膜唬峁⑾忠浦驳腞细胞能够在体内单层贴附在痵膜上,并具有正常的细胞结构与吞噬功能,提示了赴浦的琂‘行性。此后,又有许多赴浦渤晒Φ亩锸笛楸ǖ馈’俊细胞移植在技术上已趋完善,并有异体赴浦仓瘟艫牧俅脖ǖ馈’,使然而,与其他器官移植一样,异体赴浦惨啻嬖诿庖吲懦馕侍狻”】。腔主要是通过下调迟发性超敏反应鹱饔埃⑶乙览涤诰植垦J网膜屏障δ艿耐暾А薄R焯錜细胞移植于视网膜下腔会损害可以有效减少移植后免疫排斥反应的发生,但取材困难,容易引起眼部并发症;而肚,患者自体赴赡艽嬖诨蛉毕莼蚬δ芤斐!。这些都限制了细胞移植的临床应用。虹膜色素卜皮,与哂邢嗤呐咛テ鹪矗能,或存特定的环境中可以表现出某些桐似的功能。于是,有学者提出以胞替代赴浦怖粗瘟葡喙匮鄄=昀戳杏贗细胞功能及其移植进行了一系列的研究,结果发现,体外培养的赴哂型淌晒飧惺芷魍饨这些均.’』赴嗨啤Q芯炕狗⑾郑琁细胞在体外培养条件下可以表达与嗨频溺┌蜃樱浚蠖嗍赴蜃拥谋泶锼轿廾飨圆钜霫舌色素,。。阏此,臼体┌序娲鶵细胞来进行移植,并可避免异体赴浦菜临的免疫排斥反心,同时自身虹膜组织,取材方便,引起严重的眼部并发症风险年,状伪ǖ懒私獿蟮腎细胞移植于小。
局部的相对稳态盼”与赴嗤幕疲植糠置谙赴蜃悠鹱胖匾W饔谩=昀从醒д咄赴蛘呤且訧细胞为载体,提高移植后局部细胞因子的表达量有神经营养作用陋涂寡9苌勺饔谩昀词艿搅艘欢ǖ墓刈ⅰ鼠视删膜卜豢梢匝踊浩涓泄庀傅氐耐吮洹F浜螅芏嘌д咣鮅细胞移植作及赴浦病:罄此堑难芯糠⑾植坏浦睬母泄庀赴湫约趼当浦灿诼雎缒つ谑保匀痪哂懈泄庀赴耐炀茸饔茫撇饪赡芤浦驳腎细胞通过分泌营养冈子起作用“。而之前有研究发现赴浦灿谑油は腔后,不仅移植区的感光细胞退变减慢,而且距移植区较远的感光细胞亦得到了保护⋯,因而有学者认为,赴杂诟泄庀赴耐炀瘸似渫淌勺饔靡酝猓还与其分泌营养因子有关。可见,赴浦埠蠖杂诟泄庀赴耐炀瓤赡芫哂过基凶修饰的办法来提高赴承┥窬Q蜃拥谋泶锼剑蛊浣咏以期获得更好的治疗效果,为赴娲鶵细胞进行移植提供了新的思路。色素上皮衍生因子年,猅首先在培养的胎儿赴锨逯蟹⑾至苏庵志呱窬Q作用的细胞因子。之后的研究发现在很多其他组织和细胞中亦