酶蛋白的结构.ppt

文档介绍：蛋白质结构和功能的关系
举例:镰刀状细胞贫血病
镰刀状细胞贫血病是最早被认识的一种分子病,流行于非洲的一些地区,患者的红细胞形态异常,有很多呈新月状或镰刀状,在红细胞脱氧时镰刀状细胞数量增加,严重时导致红细胞破裂、溶血而致命。
镰刀状红细胞产生的原因是患者的血红蛋白异常。血红蛋白是红细胞内起携带氧气功能的一种重要的蛋白质,是一种四聚体蛋白质,由两个α亚基和两个β亚基组成(α2β2),其中α亚基包含141个氨基酸残基,β亚基包含146个氨基酸残基。镰刀状细胞贫血病患者由于基因突变,其血红蛋白(HbS)的β亚基N-末端第6号位的氨基酸由原来正常血红蛋白(HbA)的高度极性的Glu变成了非极性的Val
这种改变导致血红蛋白表面电荷减少,在脱氧状态下溶解度下降,发生不正常聚集,形成镰刀状红细胞,严重时造成红细胞破裂。血红蛋白分子共有574个氨基酸残基组成,仅仅两个β亚基上各改变了一个氨基酸残基,生理功能就发生了如此大的变化,可见蛋白质的一级结构对功能的影响之大。
牛胰核糖核酸酶复性实验
8个Cys-SH形成4个二硫键的组合方式有7×5×3=105种,因而重新形成正确配对的概率仅1/105,
第一节蛋白质一级结构研究方法
1. 蛋白质的分离纯化和相对分子质量的测定

3. 拆分并分离蛋白质分子的多肽链
4. 测定每条多肽链的氨基酸组成
5. 多肽链的N-末端和C-末端分析

7. 测定各个肽段的氨基酸顺序

9. 多肽链中二硫键位置的确定
1. 蛋白质的分离纯化和相对分子质量的测定
电泳单一带
SDS-PAGE测分子量(质谱法)

末端分析法
3. 拆分并分离蛋白质分子的多肽链
氧化法
氧化法的优点在于二硫键一旦拆开,不会重新形成连接,但在氧化过程中伴随着一些副反应,Met侧链被氧化生成亚砜,Trp侧链被破坏。
还原法
为了防止游离巯基重新氧化,还需加入烷化剂如碘乙酸,使巯基上发生取代反应而不会重新被氧化