文档介绍：华南理工大学
硕士学位论文
从尖吻蝮蛇中仿生亲和纯化新型类凝血酶及其性质研究
姓名:孔明
申请学位级别:硕士
专业:发酵工程
指导教师:姚汝华
20040501
摘要蛇毒中含有多种蛋白,近年来它们的应用价值得到了世界各地研究者的高度重视,进行了大量的分离纯化和性质研究。尤其是尖吻蝮蛇的蛇毒,由于对人血液凝聚系统有作用,具有很高的医用价值,国内外的研究者都开展了广泛的研究。但是由于纯化手段的局限性,进展不大。近年来医用蛋白的发现和生产对于纯化方法的效率提出更高的要求,需要方便快速、经济、高通量的筛选方法的出现。传统的纯化方法现在正在被高选中已经应用多年。尤其是组合化学技术的出现使得金属螯合配基在融合蛋白的纯化中广一、采用仿生亲和的方法对尖吻蝮蛇蛇毒蛋白进行了分离纯化。经过仿生亲和平台嘀址律浠纳秆。≡癯黾钢衷附近有较好专一性吸附的配基,然后二、得到的纯化蛋白进行一系列生物化学性质的检验,包括生物活性,热稳定性等,并运用先进的质谱和肽谱分析手段得到纯化蛋白的更多有用信息。的蛋白有特异性吸附。二、经过吸附条件优化,。经过洗脱条件优化,、通过检测,纯化蛋白纯度在%以上。甈缬痉治觯⑾值鞍的矗糠纸到狻炝础哇匣掖寄芡耆种破浠钚裕琍蚦安糠忠种经过全肽谱分析和数据库检索,未发现匹配蛋白。结论:成功应用仿生亲和配基库对尖吻蝮蛇蛇毒进行筛选,得到配基,该配基能专一性吸附浇牡鞍住Mü炕跫呕玫搅薍觳獯慷的蛋白样品,通过一系列性质研究,确定该蛋白为类凝血酶,数据库检索结果说明此蛋白属于新发现的蛋白,值得进一步研究。关键词:尖吻蝮蛇亲和层析蛋白纯化金属蛋白酶类凝血酶择性、针对目的产物而设计的人工亲和层析色谱代替。化学合成配基在蛋白质层析色谱泛应用。本研究主要方法如一进行纯化条件的优化,得到纯度较高的蛋白样品。主要研究成果如下:一、筛选出配基作为纯化使用介质,该配基对蛇毒蛋白中分子量为/条件下洗脱特异性表观分子量为哂辛礁鲅腔哂欣嗄C傅幕钚裕芡耆ń到庀宋鞍自活性。说明它是一种金属蛋白酶。基质辅助激光解析电离质谱测定分子量为最好。
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知咽导师签名:隝救华作者签名:幺秒。嗍学位论文原创性声明华南理工大学学位论文版权使用授权书日期:妒琁薛卵日期:弘砷年虑扇不保密呱保密口,在——年解密后适用本授权书。日期:如。牛年‘月,日本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权华南理工大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。作者签名:本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意本学位论文属于朐谝陨舷嘤Ψ娇蚰诖颉啊獭门.
第一章绪论律缀头掷爰际醺攀近年来,随着生命科学、生物技术、药学以及医疗技术的日益发展,对活性生物大分子分离和纯化的要求越来越高。另外随着后基因组时代的到来,科学家更加迫切想知道各基因表达产物的结构和功能关系,因而也需要获得高纯度的生物大分子。但是由于生物大分子往往处在体液或发酵液等几十种甚至上百种大小分子的混合物中,而且大多数的生物大分子的生理活性依赖于其习惯的生理条件,有严格的构象要求,脱离了适当同时在生化工程技术中,下游技术是生物高技术发展的重要的组成部分,离开了有效的分离技术,一项生物技术的商业化几乎是不可能的。在一个生化工程的工艺流程中,就某些生物医药而言,起初的价格并不是进入市场的障碍,尤其在尚无竞争对手或者市场需求总量较少的情况下。然而,生物医药从微克剂量的品种缦赴蜃向毫克级,甚至克级剂量品种绲タ寺】固澹=鞍的发展和转换,表现在生产规模是年产量数克,到数十,甚至数百公斤的差别。传统的分离技术主要是利用目标物质分予与其他物质又的性质差异进行分离,比如沉淀、萃取、抽提等是利用溶解度的差异,分子筛凝胶层析和超滤是利用分子大小的差异。这些传统方法的纯化倍数和生产效率较低,需要比较严格的控制条件,不利于生产工艺的稳定。因此一般生产需要多种技术组合缋胱咏换唬汗耍杷饔多个步骤。生产步骤增加使产品的回收率降低,生产成本升高【浚辉谥瘟菩陨镏破飞校啻サ闹苯由杀臼在产品的下游纯化和精制过程中产生的。利用市场上通用的分离技术不能经济高效的生产需求量大,技术难